灵芪蠲肝胶囊含药血清对PDGF诱导的大鼠肝星状细胞增殖及JAK/STAT信号通路的影响

摘要

目的:观察不同浓度的灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠肝星状细胞-T6(hepaticstellate cell-T6,HSC-T6)增殖和两面神激酶-2(janus kinase-2,JAK-2)、信号传递与转录激活因子-3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT-3)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白量表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制。
　　 方法:1.制备含药血清:SD大鼠25只,随机分为5组,每组5只,分别用生理盐水(A组,10ml／kg)、复方鳖甲软肝片药液(B组,1.5g／kg)、灵芪蠲肝胶囊药液小剂量(C1组,2.125g／kg)、中剂量(C2组,4.25g／kg)、大剂量(C3组,8.5g／kg)灌胃7天,经腹主动脉采血,静置、离心、灭活、过滤,取得含药血清。2.将各组含药血清按200ml／L分别作用于10ng／ml PDGF刺激的HSC-T6,24、48、72h后用CCK-8法测定各组HSC-T6的吸光度值并绘制生长曲线,透射电镜观察各组细胞超微结构的变化,免疫印迹法检测24h时各组细胞中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白量的表达。3.统计学处理:计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,各组间比较用单因素方差分析,多样本均数两两比较用SNK-q检验,应用SPSS16.0统计软件进行统计学分析。检验水准:双侧α=0.05,P<0.05表示有统计学意义。
　　 结果:1.对HSC-T6增殖的影响:共培养24h时,与A组比较,B、C2、C3各组药物血清均可明显抑制HSC-T6的增殖,有显著统计学差异(均P<0.01)；C1组无抑制作用(P>0.05)；B、C3组较C2组抑制明显,有统计学差异(均P<0.05)；B、C3组间抑制无统计学差异(P>0.05)。48h时,与A组比较,B、C1、C2、C3各组药物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有统计学差异(均P<0.05)；B、C3组较C1、C2组抑制明显,有统计学差异(均P<0.05)；B、C3组间抑制无统计学差异(P>0.05)；C1、C2组间抑制无统计学差异(P>0.05)；72h时,与A组比较,B、C1、C2、C3各组药物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有统计学差异(均P<0.05)；但B、C1、C2、C3组各组间抑制均无统计学差异(P>0.05)。C1、C2、C3各组药物血清在各时间点对HSC-T6的抑制作用随血清中药物浓度增加呈逐渐增强趋势。2.透射电镜下HSC-T6超微结构的改变:共培养24h后,A组细胞的细胞核形态正常,核膜结构清晰,染色质分布正常,细胞器丰富,可见大脂滴。B、C1、C2、C3组可见大量不同程度的坏死和凋亡细胞,其细胞体积变小,核膜消失,胞质内空泡增多,细胞器较少,细胞核染色质固缩,形态不规则,可见核碎裂。同一时间点,上述改变在B、C3组最明显,C2组次之,C1组最轻；且培养时间越长,改变越显著。3.共培养24h时JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表达量的变化:免疫印迹法显示,与A组相比,B、C1、C2、C3组大鼠HSC-T6中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白表达量均明显减少(均p<0.01)；C1组JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表达量均较B组高,有显著统计学差异(均P<0.01)；C2组JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表达量均较B组低,但无统计学差异(均P>0.05)；C3组JAK-2、TIMP-1蛋白表达量较B、C2组均降低,有显著统计学差异(均P<0.01),STAT-3蛋白表达量较B、C2组降低,但无统计学差异(均P>0.05)。
　　 结论:1.灵芪蠲肝胶囊可以抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,且作用具有剂量依赖性；2.灵芪蠲肝胶囊能降低JAK-2、STAT-3在活化的HSC-T6中的表达,从而阻断JAK／STAT信号通路的传导,发挥抗肝纤维化作用；3.灵芪蠲肝胶囊能降低TIMP-1在活化的HSC-T6中的表达,从而减少其对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的抑制,实现抗肝纤维化作用。

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JAK/STNT信号通路及其在肝损伤中的作用(综述)

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