灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化的大鼠肝星状细胞凋亡的影响

摘要

目的:观察灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的活化大鼠肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)的凋亡的影响,并观察其对bcl-2、bax、TIMP-1、MMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制。方法:1.制备含药血清:SD大鼠30只,随机分为3组,每组10只,分别用生理盐水(A组,10ml/kg),复方鳖甲软肝片药液(B组,1.5g/kg),灵芪蠲肝胶囊药液(C组,4.25g/kg)灌胃7天,经腹主动脉采血,静置、离心、灭活、过滤,取得含药血清。2.以PDGF10ng/ml刺激HSC-T6活化。将各组含药血清按200ml/L分别作用于HSC-T6,0、12、24、48h后用流式细胞仪检测各组HSC-T6凋亡情况以及bcl-2、bax的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测24h时各组上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TIMP-1、MMP2浓度量表达。3.统计学处理:计量资料数据均采用均数±标准差( x±s)来表示。采用SPSS13.0统计软件,分析各处理因素的主效应,采用析因设计方差分析交互效应,方差齐性检验后对多组间的比较采用单因素方差分析,组间的两两比较采用S-N-K法或Dunnett法,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.对HSC-T6凋亡的影响:固定时间,各干预因素单独效应及多重比较显示:12、24、48h,B、C组分别与A组比较,细胞凋亡率出现明显升高,有显著性差异(P<0.05),而B、C两组间的比较无明显性差异(P>0.05)。固定分组,各时间因素单独效应及多重比较显示:除A组外,B、C组在不同时间点的两两比较均有显著差异,细胞凋亡率随时间的延长出现明显上升。2.对bcl-2表达的影响:固定时间,各干预因素单独效应及多重比较显示:12、24、48h,B组、C组分别与A组比较,bcl-2的表达均出现明显下降,有显著性差异(P<0.05),而B组与C组间的比较无明显性差异(P>0.05)。固定分组,各时间因素单独效应及多重比较显示:除A组外,B组和C组在不同时间点的两两比较均有显著差异,bcl-2的表达在0h表达最高,随时间的延长整体表现为下降趋势。3.对 bax表达的影响:固定时间,各干预因素单独效应及多重比较显示:12、24、48h,B组、C组分别与A组比较,bax的表达均出现明显上升,有显著性差异(P<0.05),而B组与C组间的比较无明显性差异(P>0.05)。固定分组,各时间因素单独效应及多重比较显示:除A组外,B组和C组在不同时间点的两两比较均有显著差异,bax的表达随着时间的延长,整体表现为上调趋势。4.对TIMP-1、MMP2及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响:与 A组比较,B、C组TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原均下降,有显著统计学差异(均 P<0.01);B、C组间 TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达无统计学差异(P>0.05)。与A组比较,B、C组MMP2明显增高,有显著统计学差异(均P<0.01);与B组比较,C组MMP2表达量高,但无统计学差异(P>0.05)。结论:1.灵芪蠲肝胶囊可以诱导活化的HSC-T6凋亡,且作用具有时间依赖性。其诱导凋亡的机制可能为影响bcl-2/bax表达失衡;2.灵芪蠲肝胶囊能降低TIMP-1在活化的HSC-T6中的表达,而促进MMP2分泌。3.灵芪蠲肝胶囊能减少活化的HSC-T6分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原。总之本研究表明灵芪蠲肝胶囊可以通过影响bcl-2/bax表达失衡而介导活化的大鼠肝星状细胞凋亡,并且最终导致细胞外基质分泌减少以及降解因素增强,从而发挥其抗肝纤维化作用。

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 主要实验材料

2 主要实验试剂流式凋亡试剂盒

3 主要实验仪器流式细胞仪

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1.流式凋亡检测结果

2. 对bcl-2、bax表达的影响

3．HSC-T6 在含药血清作用 24h 后上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TIMP-1、MMP2浓度量表达变化

讨论

可溶刺激因子介导的肝星状细胞激活途径

肝星状细胞内环境状态与基因调控

肝星状细胞与其它肝细胞和免疫细胞之间的相互作用

灵芪蠲肝胶囊抗肝纤维化的分子生物学机制

对TIMP-1、 MMP2蛋白量表达的影响

对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白量表达的影响

结论

参考文献

综述肝星状细胞凋亡的研究进展

1调节HSC凋亡的蛋白

2 调节HSC凋亡的细胞因子

3 结论

参考文献