巨大芽胞杆菌（Bacillus megatherium）PS01P菌株突变株的诱变选育及其发酵条件的研究

摘要

该文以PS-01P(Bacillus megatherium)菌株为出发菌株,经过紫外线诱变,选育出一株解磷能力明显提高的菌株PS28P,并对PS28P菌株的解磷能力和该菌株的发酵条件进行了研究;同时也对PS28P菌株在土壤中的存活能力以及该菌株与胶质芽胞杆菌在解硅方面的相互作用进行了探讨.PS28P菌株对无机磷、有机磷、磷矿粉等,均有一定程度的分解能力;其中分解无机磷的能力较出发菌株相比,显著提高.实验证明该菌株分解无机磷能力的提高主要是由于有机酸分泌量的增加.获得高发酵单位(cfu/mL)的芽胞是生产生物菌肥的关键.因此该文通过单因子及正交实验对PS28P菌株的培养基组成及发酵工艺条件(碳源,氮源,装液量,发酵温度等)进行了研究.结果表明比较理想的配方是:玉米粉0.5﹪,豆粕粉3.5﹪,鱼粉0.3﹪,装液量为50mL(250mL三角瓶),35℃培养40h为宜.菌量达到23.5×10<'8>cfu/mL.在此基础上利用镇江东方生物工程设备公司生产的7L发酵罐进行发酵,在此条件下芽胞量可以达到42cfu/mL,发酵周期为36h,与原工艺相比芽胞量提高了0.79倍,培养周期缩短了10﹪.另外将发酵液制成液体及固体菌剂后,经检测所生产的肥料完全符合国家标准.另外PS28P菌株在粗土混合物中采用浸种施用方法存活效果较好.PS28P菌株与胶质芽胞杆菌在解硅方面的相互作用实验表明,PS28P菌株能够促进胶质芽胞杆菌的解硅作用.

目录

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摘要

Abstract

前言

第一章巨大芽孢杆菌PS01P菌株突变株的选育

1.1材料与方法

1.1.1出发菌株

1.1.2培养基

1.1.3菌种UV诱变选育

1.1.4培养方法

1.1.5测定方法

1.2结果与分析

1.2.1诱变剂量与死亡率几正突变率的关系

1.2.2诱变菌株解磷能力的研究

1.2.3 PS28P菌株遗传稳定性实验

1.3讨论

第二章PS28P菌株解磷能力

2.1材料与方法

2.1.1菌株

2.1.2培养基

2.1.3培养方法

2.1.4培养液中磷含量的测定

2.1.5磷的标准曲线的制作

2.1.6培养液中有机酸组成及其含量的测定

2.2结果与分析

2.2.1培养基中无机盐成分对PS28P菌株解磷能力的影响

2.2.2无机磷分解能力的测定

2.2.3有机磷分解能力的测定

2.2.4磷矿粉分解能力的测定

2.2.5培养时间对磷的释放的影响

2.2.6培养上清液中有机酸含量的测定

2.3讨论

第三章菌株发酵条件的优化

3.1材料与方法

3.1.1菌株

3.1.2培养基

3.1.3培养方法

3.1.4仪器和设备

3.1.5分析方法

3.2结果与分析

3.2.1碳源的选择

3.2.2氮源的选择

3.2.3温度实验

3.2.4装液量实验

3.2.5正交实验

3.2.6发酵罐实验

3.3讨论

第四章PS28P菌株在土壤中的生存能力

4.1材料与方法

4.1.1供试材料

4.1.2PS28P菌株的培养方法

4.1.3油菜种子的预处理

4.1.4浸种方法

4.1.5拌种方法

4.1.6土壤混合物灭菌及pH的调节

4.2结果与分析

4.2.1土壤混合物性质对PS28P菌株存活的影响

4.2.2不同细菌施用方法对PS28P菌株存活的影响

4.2.3 PS28P菌株在土壤中的存活趋势

4.3讨论

第五章PS28P菌株与胶质芽孢杆菌在解硅方面的相互作用

5.1材料与方法

5.1.1菌株

5.1.2培养基

5.1.3主要试剂和仪器

5.1.4培养方法

5.1.5分析测量方法

5.2结果与分析

5.2.1 PS28P菌株促进胶质芽孢杆菌的解硅作用

5.2.2 PS28P菌株与胶质芽孢杆菌的混合培养

5.3讨论

参考文献

致谢