热休克蛋白90调节HEK293细胞中c-Jun蛋白的稳定性的相关研究

摘要

热休克蛋白90(Heat Shock Protein 90，HSP90)是真核生物细胞中含量最为丰富的胞质蛋白之一，其重要的一项功能是作为分子伴侣参与新生客户蛋白的折叠、应激后变性蛋白的再折叠及客户蛋白的稳定性和活性调节。迄今为止，HSP90的客户蛋白已发现有100多种，主要分为转录因子、蛋白激酶、聚合酶等几大类。与其它热休克蛋白不同的是HSP90有其特异性抑制剂，常见的有格尔德霉素(Geldanamycin，GA)及其衍生物、根赤壳素等，它们常常作为检测HSP90分子伴侣活性的有力研究工具。这些化学药物与ATP竞争结合HSP90分子N端的ATP/ADP结合袋状结构域，抑制其伴侣活性，导致未折叠成熟或错误折叠的客户蛋白被蛋白酶体靶向并降解，从而影响细胞内转录调控和信号转导等多种生命活动过程。另一方面，作为一种常见的肽醛类蛋白酶体抑制剂，MGl 32(Z-Leu-Leu-leu-CHO)能够特异地阻断蛋白酶体对其底物蛋白的降解。此外，c-Jun蛋白是细胞核内重要的转录因子AP-1的主要组分之一，它能广泛地参与细胞内转录调控和信号转导。本研究旨在证明一种HSP90作用的潜在客户蛋白。有文献报道，在Jurkat细胞中，热休克在显著下调integrinα-4和转化生长因子β表达的同时可以明显诱导hsp90、c-jun基因表达的上调。因此，c-Jun蛋白获得了我们的关注。 我们的研究表明：HSP90的抑制剂GA能够以剂量和时间依赖的方式降低HEK293细胞中内源性c-Jun的蛋白水平。然而，转染HSP90质粒可以回升原先被GA明显下调的c-Jun蛋白水平；而且，过表达HSP90能够上调HEK293细胞中内源性c-Jun的蛋白水平，但不影响c-Jun的mRNA水平。此外，我们发现：HSP90通过稳定c-Jun蛋白延长c-Jun的半寿期；蛋白酶体抑制剂MGl32可以阻断GA促进的蛋白酶体降解c-Jun，从而回复c-Jun的蛋白水平。另一方面，转染HSP90质粒不影响c-Jun的磷酸化水平；但Jun-2荧光素酶报告基因分析实验表明，过表达HSP90可以剂量依赖地提高HEK293细胞内c-Jun的总蛋白转录活性。总之，在HEK293细胞中，分子伴侣HSP90能够上调c-Jun蛋白的稳定性，影响其总蛋白的活性。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

一、HSP90(HEAT SHOCK PROTEIN 90)

二、C-JUN

三、蛋白酶体

第一章GA下调HEK293细胞中内源性c-JUN的蛋白水平

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

第二章HSP90上调HEK293细胞中内源性c-JUN的蛋白水平

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

第三章HSP90延长c-JUN的半寿期

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

第四章MG132阻断GA促进的蛋白酶体降解c-JUN

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

第五章HSP90影响HEK293细胞中内源性c-JUN总蛋白的活性

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

第六章HSP90与c-JUN蛋白相互作用关系的探讨

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

全文小结

参考文献

附录

致谢