Ⅰ.毕赤酵母表达可溶性hsBAFF的纯化及生物学性质研究;Ⅱ.昆虫杆状病毒靶向肝癌基因治疗的研究

摘要

本文分两部分论述了毕赤酵母表达可溶性hsBAFF的纯化及生物学性质研究和昆虫杆状病毒靶向肝癌基因治疗的研究。 第一部分毕赤酵母表达可溶性hsBAFF的纯化及生物学性质研究。 B淋巴细胞刺激因子(BAFF)是1999年发现的肿瘤坏死因子超家族成员。BAFF在anti-IgM存在下能专一的刺激B细胞增殖和分化，因而在体液免疫中有重要的作用。其缺陷或过量表达均能引起机体的免疫失衡，从而诱发多种疾病，因此，BAFF以及抑制剂的开发有望成为治疗人体免疫缺陷和自身免疫性疾病的新型药物。鉴于此，利用常规的PCR克隆方法，将hSBAFF的cDNA克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9中，SDS-PAGE和Western blotting分析表明所分泌蛋白为糖基化的hsBAFF。重组蛋白经离子交换和分子筛层析纯度为95％，得率为l升发酵液可得102毫克hsBAFF，氨端测序后再次表明蛋白为hsBAFF。结果显示毕赤酵母表达系统表达hsBAFF可以满足科研甚至工业化生产目的。 第二部分昆虫杆状病毒靶向于肝癌基因治疗的研究。 现已发现杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞，并对肝细胞具有一定的靶向性，这提示可将杆状病毒作为一种对肝癌基因治疗的新型载体。本文对杆状病毒载体的改造及对肝癌细胞的靶向凋亡进行了进一步的研究。以绿色荧光蛋白基因为报告基因，利用Bac-to-Bac系统构建了分别含有CMV和hTERT启动子表达盒的两种重组杆状病毒。可观察到cMV启动子在Sf9细胞中可启动报告基因的表达，两种病毒在相同的感染复数下对HepG2和Hela细胞具有不同的表达效率。我们又将凋亡素基因置于hTERT启动子下，构建的重组杆状病毒BacV-hTERT-Apoptin诱导了hepG2细胞的凋亡。因此可以认为，重组杆状病毒BacV-hTERT-Apoptin可作为一种对肝癌靶向基因治疗的简便高效的基因治疗载体。

目录

声明

摘要

前言

第一部分毕氏酵母表达可溶性hsBAFF的纯化及生物学性质研究

综述部分 B淋巴细胞刺激因子(BAFF)的研究进展

实验部分

第一章 hsBAFF蛋白非融合酵母表达、纯化及生物学活性分析

第二部分昆虫杆状病毒靶向肝癌基因治疗研究

文献综述 昆虫杆状病毒靶向肝癌的基因治疗研究进展

实验部分

第二章 靶向肝癌杆状病毒载体的构建和鉴定

第三章 以靶向杆状病毒为凋亡素载体诱导肝癌细胞HepG2的淍亡

总结

附录

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