CM4-hsBAFF基因在大肠杆菌中的表达及生物学活性研究

摘要

抗菌肽是生物细胞体内特定基因编码的一类小分子多肽，也是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障，其生成和释放是机体炎症反应的重要组成部分。抗菌肽CM4不仅对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌有高效广谱的杀菌能力，而且对某些病毒、真菌和原虫也具有抑杀作用；同时它还对某些肿瘤细胞具有选择性的杀伤作用，而对正常哺乳动物和昆虫的细胞却无明显的抑杀作用。B淋巴细胞刺激因子(BAFF)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员，BAFF对活化的B细胞有强烈的促进增殖和分化的刺激作用，在免疫细胞的信号网络中具有重要的调控作用。利用抗菌肽CM4能杀伤病原微生物和BAFF能促进B细胞增殖以及分泌抗体的功能，拟实现融合蛋白对病原体的双重抑制作用，因此本实验利用基因重组技术，将抗菌肽CM4和hsBAFF的融合基因定向插入原核表达载体pET28a和pET30a，构建了融合基因的两种原核表达载体pET28a/CM4-hsBAFF和pET30a/CM4-hsBAFF，并将两种原核表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中，通过实验摸索确定了两种融合蛋白表达的最佳温度和IPTG浓度，在宿主菌中获得高效表达，表达产物经Ni2+-IDA亲和层析和Sephardex G-75凝胶过滤层析方法来纯化获得目的蛋白。经鉴定，融合蛋白具有抗菌活性和刺激B淋巴细胞增殖的生物学活性，该技术可以制备具有两种不同功能的活性蛋白。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分文献综述

第一章抗菌肽的研究进展

1抗菌肽的发现

2抗菌肽的分类和理化性质

3抗菌肽的药理作用

4抗菌肽的作用机制

5抗菌肽的基因工程研究

6抗菌肽的应用前景

第二章人B淋巴细胞刺激因子的研究进展

1 BAFF的基因和蛋白结构

2 BAFF的组织和细胞分布

3 BAFF的生物学功能

4 BAFF刺激B细胞产生的胞内信号的研究

5 BAFF对免疫反应的调节作用

第二部分实验内容

第三章pET28a/CM4-hsBAFF融和蛋白的表达、纯化及生物活性研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

第四章pET30a/CM4-hsBAFF融和蛋白表达、纯化及生物活性研究

1实验材料

2实验方法

3实验结果

第三部分讨论

1融合基因CM4-hsBAFF的扩增

2表达系统中的问题

3融合蛋白的诱导表达条件

4融合蛋白的生物活性

参考文献

全文总结

附录

致谢