利用性成熟前山羊卵泡卵母细胞体外生产胚胎的研究

摘要

本研究以长江三角洲白山羊为研究对象，分别研究了羔山羊不同日龄及激素剂量对卵泡发育及卵巢组织学的影响；与成年羊对比，研究了性成熟前山羊卵母细胞体外减数分裂进程；体外培养成熟的卵母细胞进行体外受精，研究了性成熟前山羊卵母细胞卵龄、成熟过程和受精过程中卵丘存在程度对卵母细胞发育能力的影响，并且比较了性成熟前山羊不同直径卵母细胞体外发育能力，进一步就卵母细胞体外受精及受精卵体外培养方案进行了优化，旨在提高性成熟前山羊卵泡卵母细胞体外胚胎生产效率。 1．日龄和激素剂量对羔山羊COCs的获得影响显著。FSH处理后45日龄羔羊卵巢可见卵泡数、COCs数及未扩展COCs数均显著高于90日龄(P<0.05)。45日龄FSH70组卵泡数和COCs数显著高于FSH 40组，但未扩展COCs数低于FSH 40组。FSH70组裸卵比例较高，未扩展COCs数较FSH 40组低。FSH 40组45日龄羔羊平均每只单侧卵巢获得可用卵母细胞23.33±1.53枚，显著高于其它各组(P<0.05)。切片组织学观察发现：FSH处理对原始卵泡、初级卵泡的直径影响不显著，但对卵子直径影响显著，均属正常卵子直径范围内(130～150μm)。FSH 40处理组生长卵泡数明显高于FSH70处理组，其中FSH 70组卵泡较FSH 40组大。 2．成年山羊和性成熟前山羊卵母细胞体外成熟过程中减数分裂各时相出现时间不同。在整个体外成熟培养过程中，性成熟前山羊卵母细胞GV期存在时间较长(7.21h)，在成熟培养23.96h后才能进入MⅡ期；成年羊卵母细胞GV期存在时间相对较短(2.94h)，大约在成熟培养20.64h后，进入MⅡ期。体外成熟培养24h和27h，成年羊卵母细胞成熟率差异不显著，但是性成熟前山羊卵母细胞成熟率差异显著(P<0.05)。与成年山羊相比，羔山羊卵母细胞孤雌发育能力较差，可能与其卵母细胞本身成熟缺陷有关。 3．体外成熟24h、27h和30h，性成熟前山羊卵母细胞受精率、卵裂率差异不显著(P>0.05)，但显著高于21h组(P<0.05)。成熟24h和27h卵母细胞桑椹胚囊胚率显著高于成熟21h和30h组(P<0.05)。 4．去除卵丘的卵母细胞和裸卵体外培养可以成熟，但受精率、卵裂率、桑椹胚囊胚率显著低于带卵丘的卵母细胞(P<0.05)。成熟前机械去除卵丘严重影响性成熟前山羊卵母细胞发育能力。1～3层和多层卵丘的卵母细胞受精率、卵裂率、桑椹胚囊胚率差异不显著(P>0.05)。 5．性成熟前山羊卵母细胞受精前卵丘存在程度对其受精率和卵裂率影响不显著(P>0.05)，但受精前完全去掉卵丘严重影响胚胎后续发育能力，桑椹胚囊胚率显著低于带卵丘的卵母细胞。卵丘完整组与部分卵丘去除组卵母细胞体外发育能力差异不显著。 6．性成熟前山羊卵母细胞GVBD发生率及成熟率随其直径的增加而显著增加。成熟培养0h，直径<110μm卵母细胞GV期比例显著高于其它各组。随着卵母细胞直径的增加，GVBD发生率也增加。成熟培养27h，直径>135μm组MⅡ期比率(75.00％)显著高于其它组(P>0.05)，其中直径<110μm组卵母细胞体外培养不能达到MⅡ期。 7．性成熟前山羊卵母细胞受精率、卵裂率随其直径的增加而显著提高(P<0.05)。卵母细胞直径<110μm、110～125μm、125～135μm组桑椹胚囊胚率差异不显著(P>0.05)，但显著低于直径>135μm组(P<0.05)。 8．TALP液较BO液更适合性成熟前山羊卵母细胞体外受精所用。 9．SOFaa较CRlaa更适合性成熟前山羊早期胚胎体外培养所用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

文献综述部分

第一章山羊体外受精的研究现状

1卵母细胞的获得与IVM

2体外受精研究

3早期体外受精胚胎的培养

4IVF的研究现状分析

参考文献

第二章幼畜胚胎体外生产技术的研究进展

1 JIVET的研究现状

2 JIVET的步骤

3影响JIVET的因素

4 JIVET存在的问题

5 JIVET的应用前景

参考文献

试验研究部分

第三章FSH诱导羔山羊卵泡发育的研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

参考文献

图 版

图版说明

第四章性成熟前山羊卵母细胞减数分裂进程的研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

参考文献

图 版

图版说明

第五章性成熟前山羊胚胎体外生产的研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

参考文献

图 版

图版说明

总体结论

攻读硕士期间发表的学术论文

致 谢