犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测及特性分析

摘要

犊牛腹泻是由致病性大肠杆菌感染犊牛引起的一种常见临床疾病。为了解南京地区犊牛腹泻大肠杆菌的流行情况,本文对南京地区犊牛大肠杆菌腹泻进行了病原流行病学调查,并对110株牛源大肠杆菌中的LEE(ler、eaeA)和HPI(irp2、fyuA)基因片段进行了检测,并选取典型代表菌株进行了let、eaeA、irp2、fyuA基因片段的核苷酸序列测定,为研究犊牛腹泻大肠杆菌的致病机理,更好地预防和控制犊牛腹泻进行了有益的探索。 1. 犊牛腹泻大肠杆菌的分离与鉴定 对南京地区犊牛腹泻进行了病原流行病学调查,通过病原分离和生化鉴定,共分离到110株牛源大肠杆菌,同时对分离的细菌进行了血清型鉴定及药敏试验。在分离的110株牛源大肠杆菌中,共有50株细菌被鉴定出0血清型,0血清型主要有078(11/50)、036(8/50)、015(7/50)、026(5/50)、08(3/50)、02(3/50)、09(2/50)、021(2/50)、035(2/50)、01(2/50)、086(2/50)。对其中57株分离菌株进行了肠杆菌科10种常规抗生素药敏试验,试验结果表明,57株分离菌对复方新诺明,氨苄青霉素全部耐药；对氯霉素、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星、头孢孟多、复达欣、阿米卡星的耐药百分率分别为为33.33％、10.53％、8.77％、7.01％、5.26％、1.75％、1.75％；对头孢西丁全部高度敏感。 2. 犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测 通过PCR方法,对犊牛腹泻大肠杆菌LEE毒力岛ler和eaeA基因、HPI毒力岛irp2和fyuA基因进行检测,并对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了0抗原分析。在分离的110株牛源大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛33株(30％),具有LEE毒力岛的菌株10株(9.1％),具有HPI毒力岛的菌株28株(25.5％),同时具有LEE和HPI毒力岛的菌株6株(5.5％)。 3. 犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的序列测定及分析 将PCR方法扩增出的let、eaeA、irp2和fyuA基因片段产物进行胶回收,连接到pMD 18-T Vector上转化DH5 α感受态细胞后送TaKaRa公司测序。结果表明犊牛腹泻大肠杆菌ler、eaeA,irp2和fyuA基因片段的PCR扩增产物分别是196bp、552bp、301bp、953bp。用DNAStar软件对犊牛腹泻大肠杆菌ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段序列与GenBank中报道的相应参考菌株各基因片段进行核苷酸同源性比较分析,同源性高达88.3％～100％,说明上述4个基因片段具有较高的同源保守性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文部分缩写的中英文对照

声明

引 言

第一篇文献综述

第一章犊牛腹泻大肠杆菌病的研究进展

1病原

2流行病学

3临床症状

4诊断

5治疗

6预防

参考文献

第二章细菌毒力岛的研究进展

1毒力岛基本特征及分类

2结构与功能

3致病性细菌的毒力岛

4毒力岛在细菌毒力进化及致病性中的作用

参考文献

第三章大肠杆菌LEE和HPI毒力岛分子检测研究进展

1应用PCR方法检测肠致病性大肠杆菌LEE致病岛

2应用PCR方法检测肠致病性大肠杆菌耶尔森菌HPI强毒力岛

3应用多重PCR方法检测大肠杆菌中LEE和HPI毒力岛相关基因

4 PCR检测大肠杆菌LEE和HPI毒力岛展望

参考文献

第二篇实验研究

第一章犊牛腹泻大肠杆菌的分离与鉴定

1材料和方法

2结果和分析

3讨论

参考文献

第二章犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

1材料和方法

2结果和分析

3讨论

参考文献

第三章犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的序列测定及分析

1材料和方法

2结果和分析

3讨论

参考文献

全文总结

硕士期间发表论文

致 谢

附 录