猪链球菌3种主要毒力因子多重PCR快速检测方法的建立及其初步应用

摘要

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人畜共患病病原，根据菌体荚膜多糖抗原性的不同，分为35个血清型(1-34型，1/2型)。世界范围内以SS2(Streptococcus suis type2，SS2)流行最广，致病性最强，而且可引起人的感染并致死，其次是1型、7型和9型。上海地区作为全国大规模猪养殖场较多的地区之一，是养猪面积较大，输出、输入较大的城市，因此及时掌握上海地区致病性猪链球菌及其毒力因子的流行病学，为以后预防和控制大规模暴发猪链球菌具有重要的意义。 2006年-2008年期间，通过对上海市动物疫病预防控制中心日常门诊和4个某大型猪场的猪链球菌2型临床调查，根据形态、培养特性，从1536份样品中分离鉴定了304株猪源链球菌，利用已发表的猪链球菌2型菌株的荚膜多糖CPS2J的基因进行单重PCR检测，结合生化特性鉴定，鉴定出12株猪链球菌2型。对12株SS2进行药敏试验，结果表明对头孢拉啶、青霉素等产生了一定程度的耐药性，生化试验结果表明分离株的生化特性不稳定。 建立了猪链球菌3种主要毒力因子多重PCR快速检测方法，实现对猪链球菌3种主要毒力因子的快速检测，根据猪链球菌3种主要毒力因子epf、sly和gapdh的基因序列，设计合成3对特异性引物，通过优化多重PCR体系，建立猪链球菌3种主要毒力因子的快速检测方法，并用此多重PCR方法对16株毒力因子背景情况清楚的猪链球菌菌株(包括10株SS2，3株SS1、1株SS7、2株SS9)进行检测，结果与已知背景情况相符合，表明此方法检测的结果具有较高的准确性。结果表明建立的多重PCR方法具有特异性高、敏感性好、重复性高，操作简单、节约时间和低成本等特点。为该病快速诊断和对猪链球菌毒力因子的分子流行病调查提供新的检测方法。 利用建立的猪链球菌3种主要毒力因子多重PCR方法检测了273株致病性猪链球菌菌株，以分析其三种重要毒力因子的分布。结果表明gapdh、epf和sly在致病性猪链球菌中检出率比较高，检出率分别为36.2％(99/273)、52.7％(144/273)、78.4％(214/273)。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

第一章文献综述 猪链球菌及其毒力因子的研究进展

第二篇研究报告第一章上海地区猪链球菌2型的分离和鉴定

摘要

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第二篇研究报告 第二章 猪链球菌3种主要毒力因子多重PCR快速检测方法的建立

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第二篇研究报告 第三章 猪链球菌3种主要毒力因子多重PCR快速检测方法的初步应用

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

全文总结

致谢