小鼠原始生殖细胞(PGCs)中组蛋白H2A变体的分布

摘要

原始生殖细胞(Prmordial germ cells，PGCs)是生殖细胞的祖细胞，存于8.5—13.5dpc(days post coitum)的鼠胚，具有迁移、增殖和性别分化等特性.近年研究证明PGCs发育过程中发生着大量的DNA及组蛋白的修饰，说明PGCs的特性可能与表观遗传修饰相关，从组蛋白变体角度分析是表观遗传学研究新的热点.本实验通过间接免疫荧光检测了不同发育时期舍有PGCs的组织石蜡切片、单细胞及培养两天的PGCs中组蛋白H2A三种变体-macroH2A、H2A.X和H2A.Z的分布.研究结果如下： 1.免疫荧光检测小鼠PGCs中组蛋白H2A变体的分布 分别采集8.5-13.5dpc五个时间段的含有PGCs的胚胎组织和PGCs单细胞，对组织进行石蜡切片间接免疫荧光，对单细胞进行间接免疫荧光检测.macroH2A在PGCs进入生殖嵴(10.5dpc)和性别分化以后(13.5dpc)，分布状态发生变化；H2A.X在性别分化后(13.5dpc)分布发生变化；H2A.Z在进入生殖嵴和性别分化过程中(12.5dpc)及以后(13.5dpc)分布发生变动.说明组蛋白H2A的这三种变体确实参与了PGCs的发育。 2.免疫荧光检测培养后PGCs中组蛋白H2A变体的分布 采集主要时间段的小鼠PGCs体外培养两天，分别将体外培养1d和2d的PGCs通过间接免疫荧光检测组蛋白H2A三种变体的分布，以体内同期的PGCs做标准对照，结果发现：macroH2A的分布在培养的细胞中较对照细胞迟缓；H2A.Z分布基本与对照基本一致；H2A.X在培养的进入生殖嵴前(8.5dpc)的PGCs中很快消失，之后各阶段培养的PGCs中H2A.X分布基本正常.另外，实验还发现，11.5dpc时PGCs的性别发育方向可能已确定。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略语的中英文对照

声明

第一部分文献综述

第一章小鼠原始生殖细胞的生物学特性

1 PGCs的发育

2 PGCs的生物学特性

3 PGCs的体外培养

第二章组蛋白变体研究进展

1组蛋白变体及H2A变体的主要特征

2 H2A变体的生物学特性

3组蛋白H2A变体的替换

4实验目的与意义

第二部分试验部分

第三章鼠胚原始生殖细胞中组蛋白H2A变体的分布

引言

第一节石蜡切片的间接免疫荧光研究

第二节单细胞的间接免疫荧光研究

第四章 组蛋白H2A变体在培养的PGCs中的分布

1引言

2实验材料

3实验方法

4实验结果

5讨论与分析

全文结论

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表学术论文