鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白的蛋白质组学分析及其免疫保护性研究

摘要

鸭疫里默氏杆菌（Riemerellaanatipestifer，RA）是一种隶属于黄杆菌科、无运动性、不形成芽孢的革兰氏阴性菌，可引起鸭、火鸡和其它多种鸟类的败血性感染。该病发病率和死亡率较高，已成为危害各国养鸭业的最为严重的传染病之一。该菌对青霉素、氯霉素、庆大霉素、氟喹酮类药物均敏感，由于各地区分离的菌株不同和对药物的敏感性的差异，加之用药不当导致抗药菌株的出现，使得人们不得不寻找有效的保护性抗原来防控该病。细菌的外膜蛋白是一类具有良好免疫原性的蛋白，但是目前对于鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白的组成和功能却知之甚少。本研究利用二维电泳技术，成功建立了RA1型外膜蛋白蛋白质图谱，通过ESI-MS鉴定了61个蛋白斑点，利用PSORTb在线程序对鉴定出来的蛋白质点进行亚细胞定位分析，其中外膜蛋白27个，占44.26％；周质蛋白有1个，占1.64％；细胞膜蛋白有6个，占9.84％；胞质蛋白有5个，占8.2％；定位不明显的蛋白有22个，占36.07％。其功能涉及生物合成和物质代谢等领域。进一步利用Westernblot分析确定了8个与兔高免血清反应性蛋白，这些蛋白在免疫反应中可能起着重要保护作用。
　　 以TonB依赖的外膜蛋白受体为研究对象，以RA1基因组DNA为模板，根据获得的TonB依赖的外膜受体蛋白肽片段序列，设计简并引物进行PCR反应获得1216bp的部分编码序列片段。以RA1基因组DNA为模板，利用改良的Sitefinding-PCR方法成功得到了2262bp的全长序列，编码753个氨基酸。以该核苷酸序列编码的氨基酸序列进行BLASTp搜索表明其包含有TonB依赖性外膜受体蛋白的保守结构域，其功能类似大肠杆菌FecA蛋白。首次得到了RATonB依赖性外膜受体蛋白的基因序列，同时验证了质谱分析结果的可靠性。
　　 分别提取了RA1、RA2、RA3、RA4、RA5五个血清型的外膜蛋白，研究外膜蛋白在不同血清型之间的交叉保护作用。结果发现外膜蛋白对同一血清型的保护力能达到100％，而异型之间缺少保护力或者保护力很弱。

目录

文摘

英文文摘

缩写词与英汉对照

文献综述

第一章 鸭疫里默氏菌病的研究进展及细菌外膜蛋白的研究方法

1．鸭疫里默氏菌病的研究进展

2细菌外膜蛋白的研究进展

3 外膜蛋白的研究方法--蛋白质组学双向电泳技术

参考文献

研究内容

第二章 血清Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白蛋白蛋白质图谱分析及不同血清型之间的比较分析

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

参考文献

第三章 RATonB-dependent outer membrane receptor 基因全长序列的克隆与生物信息学分析

1 材料与方法

2 结果

3 结论与讨论

参考文献

第四章 鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白的免疫保护效果的初步研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

参考文献

全文总结

致 谢