呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备及其免疫分析方法的建立

摘要

本文以呋喃西林代谢产物氨基脲为原料,与对硝基苯甲醛、邻硝基苯甲醛反应合成两种呋喃西林代谢物抗体的检测目标物(4-NPSEM、2-NPSEM),与对醛基苯甲酸反应合成半抗原(4-CPSEM)。并采用混合酸酐法将4-CPSEM分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原,分别作为免疫原和包被原。将CPSEM-BSA免疫三只BALB/c小鼠,最后选择最优小鼠(1号小鼠)进行细胞融合试验。利用杂交瘤技术,经筛选及克隆化,共获得3株稳定分泌抗CPSEM-BSA抗体的杂交瘤细胞株3E8、5C6和6D10,应用间接竞争ELISA(ciELISA)进行抗体特异性比较,最后得出最佳杂交瘤细胞株为5C6。将此细胞株扩大培养并经腹腔免疫BALB/c小鼠制备腹水,并对腹水中的抗体进行效价及特异性鉴定。试验结果表明:当包被原浓度为0.5ug/mL、1 ug/mL时,单克隆抗体的效价分别为320000和640000。
　　 以人工合成的4-CPSEM-OVA为包被抗原和制得的抗呋喃西林代谢物单克隆抗体(4-CPSEM-BSA-McAb)为基础,在明确了该方法其它条件及基本参数基础上建立了间接竞争ELISA方法和化学发光(CLIA)分析方法。试验结果表明:ELISA最适检测范围为80—0.1 ng/mL,最低检测限为0.03 ppb,标准曲线的批内和批间变异系数分别为2.480％、3.385％,IC50=2.19 ng/mL,并得出回归方程为y=-0.2843x+0.5969,R2=0.9628；CLIA最适检测范围80-0.1 ng/mL,最低检测限为0.02 ppb,IC50=1.85 ng/mL,得出回归方程为y=-0.2687x+0.572,R2=0.9776。