断奶仔猪胃肠道乳酸菌与葡萄芽孢杆菌分离鉴定及其生物学特性研究

摘要

目前，仔猪腹泻的防治主要使用抗生素，但耐药菌的产生、抗生素污染等问题已引起人们的高度重视。微生态制剂（又称益生菌制剂）在防治肠道疾病方面，不仅安全无害，无残留，不产生抗药性，还有提高饲料利用率，促进动物生长，改善产品品质等作用，是国内外研究的热点，但防效低和使用成本较高是推向实用的瓶颈。本研究旨在从仔猪肠道中筛选防治效果显著、制剂生产性能优良的益生菌菌株，并对其功能和生物学特性进行研究，为仔猪专用高效益生菌制剂的研制提供材料和技术支持。本文内容包括三个部分:
　　 试验1:断奶仔猪胃肠道乳酸菌及芽孢杆菌的分离鉴定
　　 从断奶仔猪胃肠道分离乳酸菌和芽孢杆菌，结合细菌的形态特征、生理生化指标，运用16SrRNA基因序列分析方法对其进行鉴定。结果表明，分离株WR、KR、HR、JR分别为胃、空肠、回肠、结肠源的唾液乳杆菌（Lactobacillussalivarius）;ZR株为直肠源的约氏乳杆菌（Lactobacillusjohnsonii）;MR株为盲肠源的粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）;分离株WY、SY、KY分别为胃、十二指肠、空肠源的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）;HY株为回肠源的蜡样芽胞杆菌（Bacilluscereus）。各分离株的生长曲线有明显差异，HR、ZR和WY株的生长速度较快，分别于接种后第12、12和20小时达到生长高峰期，显示了良好的培养特性。
　　 试验2:断奶仔猪胃肠道分离的乳酸菌与芽孢杆菌生物学特性研究
　　 对10株从断奶仔猪胃肠道分离的乳酸菌(WR、KR、HR、MR、JR、ZR)和芽孢杆菌(WY、SY、KY、HY)的生物学特性进行了分析，在胆盐浓度(M/V)分别为0.3％、0.6％的培养基中培养16h，都能生长繁殖，说明这10株菌都具有一定的耐胆盐能力。乳酸菌WR、KR株，经pH值为3的模拟胃液处理12h后，活菌数量有所增加;而其它4株乳酸菌与4株芽孢杆菌均有减少，但仍然保持在同一个数量级(108cfu/mL)上，说明8菌株对于模拟胃肠液具有良好的耐受性。10菌株经45℃～55℃处理30min不影响其生长。6株乳酸菌对大肠杆菌的抑菌率均在80％以上，对沙门氏菌抑菌率除WR为0％，其它均在40％以上;4株芽孢杆菌中KY、HY对大肠杆菌及沙门氏菌的抑菌率在80％以上，而WY、SY的抑菌率在40％以下。结合前面的试验结果，KR、HR、MR、JR、ZR、KY、HY可作为优良的益生菌候选菌。
　　 试验3:唾液乳杆菌HR株对动物肠道菌群及生长性能的影响
　　 运用PCR-DGGE及16SrRNA技术分析猪源唾液乳杆菌HR株对肠道菌群失调小鼠粪便菌群的影响，并通过喂食HR菌株研究其对断奶仔猪生长性能的影响。DGGE图谱显示，肠道菌群失调小鼠经HR菌悬液灌胃5-10天，粪便中的优势条带有所增加;灌胃15天，优势条带逐渐减少，经序列分析，优势条带与菌株HR同源性为99％;同时，菌株HR治疗组小鼠体重平均增长率显著高于自然恢复组(P＜0.05)。说明，猪源唾液乳杆菌株HR具有较强的抗逆性，可定植于小鼠肠道，能有效调节肠道菌群数量的变化并促进小鼠生长。在断奶仔猪试验中，试验A（唾液乳杆菌HR）组的料重比及腹泻率与试验B（空白对照）组比均显著降低(P＜0.05)。说明，猪源唾液乳杆菌株HR能降低断奶仔猪料重比及腹泻率，可作为优良的猪用益生菌株。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略语表(Abbreviation)

1 益生菌概述

2 乳酸菌

2．1 乳酸菌的定义

2．2 乳酸菌的一般特性

2．3 饲用乳酸菌的作用机理

3 芽孢杆菌

3．1 芽孢杆菌定义

3．2 芽孢杆菌的一般特征

3．3 饲用芽孢杆菌的作用机理

参考文献

第一章 断奶仔猪胃肠道乳酸菌与芽孢杆菌的分离鉴定

1 材料与方法

1．1 主要试剂

1．2 断奶仔猪

1．3 细菌分离

1．4 细菌鉴定

1．5 生长曲线的测定

2 结果

2．1 菌株分离及形态特征

2．2 生理生化特征

2．3 16S rRNA序列分析

2．4 生长曲线的测定

3 讨论

参考文献

第二章 断奶仔猪胃肠道分离的乳酸菌与芽孢杆菌生物学特性研究

1 材料与方法

1．1 主要试剂

1．2 耐胆盐试验

1．3 温度敏感试验

1．4 模拟胃肠道耐受试验

1．5 抑菌试验

2 结果与分析

2．1 耐胆盐试验

2．2 温度敏感试验

2．3 模拟胃肠液耐受试验

2．4 抑菌试验

3 讨论

参考文献

第三章 唾液乳杆菌HR株对动物肠道菌群及生长性能的影响

1 材料与方法

1．1 菌株及主要试剂

1．2 试验动物分组及处理

1．3 小白鼠粪样总DNA提取及PCR扩增

1．4 DGGE及优势条带的克隆分析

1．5 断奶仔猪的饲养管理

1．6 检测指标

2 结果与分析

2．1 菌株对小鼠肠道菌群的影响

2．2 菌株对小鼠生长性能的影响

2．3 菌株对断奶仔猪生产性能影响

3 讨论

参考文献

全文总结

附录：常用试剂的配制

致谢

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