MSI-99m基因转化油菜及其转基因植株抗病性分析

摘要

油菜作为一种重要的经济作物，提供高蛋白的可食用植物油，其产量和品质一直受菌核病的严重影响。目前一般采用的防治措施主要是化学农药防治，但是近年来备受关注的环境污染以及农药品残留对人体的伤害，使得人们迫切需要一种新的经济环保的途径防止菌核病的发生。育种家们一直在努力寻找一种稳定的高抗品种，以图改善这种现象。
　　MSI-99m是由本实验室根据马铃薯密码子偏好性进行人工合成的MagaininⅡ基因类似物，可抑制细菌、真菌以及病毒的广谱抗菌肽。人工合成的MSI-99m经序列改变后，可以在植物体内稳定表达而不被降解。本研究利用农杆菌介导的方法，将MSI-99m基因导入甘蓝型油菜栽培品种‘中油821’中，并对转基因油菜的菌核病抗性进行了评价。结果如下:
　　1.通过农杆菌转化，共得到25株Kan抗性苗，对其进行PCR验证，9株抗性苗被检测到目的基因条带。对其中7个株系进行qRT-PCR分析，MSI-99m基因在转基因株系中有不同程度的转录表达，而野生型对照中未检测到表达。
　　2.分别采用离体叶片、苗期植株和开花期植株接种试验对转基因油菜进行了菌核病抗性鉴定。核盘菌接种4d后，转基因油菜的叶片发病症状比对照轻，病情扩散迟缓。幼苗期和开花期的油菜在感染核盘菌后6-7天出现症状，与对照相比，7个转基因系均表现出不同程度的抗性增强，其中株系M14对菌核病的耐性最强，病情最弱，植株仍保持正常生长。
　　以上结果表明，MSI-99m基因在油菜体内的表达可增强油菜对菌核病的抗性。

目录

声明

摘要

缩略词及其英汉对照

引言

第一章 文献综述

1 核盘菌及菌核病的研究

1．1 病原及生物学特性

1．2 核盘菌的寄主

1．3 菌核病的症状

1．4 核盘菌的侵染方式

1．5 核盘菌的致病机理

1．6 菌核病的防治方法

1．7 油菜抗菌核病基因工程研究

2 抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)简介及其研究进展

2．1 抗菌肽的种类

2．2 抗菌肽的理化性质

2．3 抗菌肽的作用机理

2．4 抗菌肽的生理功能

2．5 抗菌肽Magainins与其类似物MSI-99的研究进展

第二章 MSI-99m基因转化油菜与转基因植株分子鉴定

1 材料

1．1 植物材料

1．2 菌种与质粒

1．3 培养基

1．4 主要试剂

1．5 PCR反应引物

2 方法

2．1 油菜的遗传转化

2．2 阳性苗的PCR快速检测

2．3 MSI-99m基因的qRT-PCR分析

3 结果

3．1 转基因油菜植株再生

3．2 转基因植株的PCR鉴定

3．3 qRT-PCR分析

4 讨论

4．1 苗龄对芽再生的影响

4．2 农杆菌侵染与共培养

4．3 褐化和玻璃苗现象

4．4 受体类型对转化率的影响

4．5 MSI-99m基因在转基因植株中的表达差异

第三章 转基因油菜的抗病性鉴定

1 材料

1．1 植物材料

1．2 供试菌株

1．3 培养基

2 方法

2．1 核盘菌培养

2．2 孢子悬浮液的配制

2．3 离体叶片孢子悬浮液接种法

2．4 幼苗期叶片喷洒孢子悬浮液接种法

2．5 花期茎杆菌丝接种法

3 结果

3．1 离体叶片抗病试验

3．2 幼苗期整株抗病试验

3．3 花期抗病试验

4 讨论

全文结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的研究论文

致谢