香菇二次培养中常见霉菌的分离鉴定及防控

摘要

本研究对采自上海国森生物科技有限公司工厂化栽培菇房中经二次培养后受霉菌污染的香菇(Lentinula edodes)菌块进行分离纯化，获得了49株霉菌菌株，并对49株霉菌进行了形态学、核糖rDNA内部转录间隔区(ITS)序列分析以及生物学特性研究，同时，选用3种抑菌剂进行实验室筛选试验，通过比较3种抑菌剂对霉菌和香菇的抑制效果，筛选出绿色高效的抑菌剂。具体结果如下:
　　49株霉菌经形态学鉴定及ITS/5.8S序列分析，结果表明这49株霉菌分别属于木霉属、青霉属和毛霉属。鉴定到种，分别为:哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、侧耳木霉（Trichoderma pleuroticola）、深绿木霉（Trichoderma atroviride）、短密青霉(Penicillium brevicompactum)和总状毛霉(Mucor racemosus)。这5种霉菌是香菇二次培养中的优势污染种。
　　供试霉菌和香菇的生物学特性研究结果表明，温度、pH及其互作都对供试菌株的菌丝生长有极显著影响。3种木霉菌丝在10-34℃条件下能够生长。总状毛霉和申香F2香菇菌丝在10-30℃条件下能够生长，但在34℃下停止生长。在pH值为3-9条件下，哈茨木霉、侧耳木霉、深绿木霉、总状毛霉菌丝能够生长，申香F2香菇菌丝在pH值为3-7条件下能够生长，但在pH值为7以上不能生长。哈茨木霉和侧耳木霉的最适生长条件为:pH值为5，温度30℃，深绿木霉的最适生长条件为:pH值为4，温度25℃，总状毛霉的最适生长条件为pH值为6，温度25℃，申香F2香菇的最适生长条件为pH值为5，温度25℃。
　　3种抑菌剂对哈茨木霉、侧耳木霉、深绿木霉和总状毛霉的菌丝生长都有较好的抑制作用，抑制效果由强到弱依次为:H2O2，中生菌素，克霉灵。这3种抑菌剂对香菇菌丝的生长也有一定的影响。3种抑菌剂对5种霉菌的孢子萌发都有较好的抑制作用，抑制效果由强到弱依次为H2O2、中生菌素、克霉灵。对比3种抑菌剂的安全性由高到底依次为，H2O2、中生菌素、克霉灵。其中H2O2在三者中安全性最高。综合可得，在适宜的浓度下，H2O2最适合在香菇工厂化栽培中应用。
　　香菇二次培养中污染霉菌优势种的最适生长温度为25-30℃，最适pH值为5-6，因此，如果要避免大量的霉菌污染，在控制生产环境方面，温度保持在25℃以下，pH值在5以下。抑菌剂筛选实验结果表明H2O2对供试霉菌的菌丝生长及孢子萌发有较好的抑制作用，在适宜的浓度下，可以利用H2O2进行药剂防治。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1 香菇栽培概况

1．1 香菇栽培条件

1．2 香菇栽培方式变革

1．3 香菇工厂化生产发展概况

2 霉菌研究概况

2．1 霉菌分类鉴定研究进展

2．2 香菇栽培中污染霉菌研究概况

3 霉菌防治研究概况

3．1 霉菌药剂防治概况

3．2 生物防治

4 本研究的目的与意义

第二章 香菇二次培养中常见霉菌的分离鉴定

1 材料与方法

1．1 供试培养基

1．2 实验试剂

1．3 样品采集

1．4 分离纯化

1．5 形态学鉴定

1．6 分子生物学鉴定

2 结果与分析

2．1 形态学鉴定结果

2．2 ITS／5．8S PCR电泳结果

2．3 霉菌ITS序列同源性比对结果

2．4 49株霉菌ITS序列构建的系统发育树

2．5 分离频率

3 小结

第三章 霉菌与香菇生物学特性研究

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 供试培养基

1．3 菌丝活化

1．4 霉菌和香菇菌丝最适生长温度的测定

1．5 霉菌和香菇菌丝最适pH的测定

1．6 温度和pH的互作效应对霉菌和香菇菌丝的影响分析

2 结果分析

2．1 温度对霉菌及香菇菌丝生长的影响

2．2 pH对霉菌及香菇菌丝生长的影响

2．3 温度和pH的互作效应对霉菌和香菇菌丝的影响

3 小结

第四章 霉菌抑菌剂实验室筛选

1 材料与方法

1．1 实验菌株

1．2 供试培养基和试剂

1．3 菌丝活化

1．4 抑菌剂对霉菌及香菇菌丝的抑制试验

1．5 抑菌剂对霉菌孢子萌发的抑制试验

2 结果与分析

2．1 抑菌剂对霉菌和香菇菌丝的抑制作用比较

2．2 抑菌剂对霉菌孢子荫发的抑制作用比较

3 小结

第五章 全文总结

参考文献

致谢