索拉胶对小鼠肝损伤保护和抗肿瘤作用研究

摘要

索拉胶(Salecan)是一种新型水溶性胞外黏性β-1，3-葡聚糖，前期研究表明其具有多种生物学活性。本论文采用C57BL/6小鼠构造急性肝损伤和黑色素瘤转移模型，研究索拉胶在保护肝损伤和抗肿瘤方面的作用。
　　实验对照组小鼠经500mg/kg D-半乳糖胺(D-GalN)和5μg/kg脂多糖(LPS)同时处理后，建造D-GalN/LPS急性肝损伤模型。实验对照组小鼠6h后开始死亡，24h后存活率为0％;经过索拉胶预处理的小鼠存活率明显提高，24h后存活率为100％。经过索拉胶预处理可以显著降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性，组织病理学检测表明肝细胞坏死和病变显著减少。经过索拉胶预处理还可以显著降低肝损伤模型小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的水平，并且能降低肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平。在细胞实验中，索拉胶能够显著减少受到LPS刺激的小鼠巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA含量，且呈剂量依赖性抑制。进一步研究表明，索拉胶能够降低经LPS刺激的巨噬细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路c-Jun氨基末端激酶(JNK)和胞外信号调节激酶(ERK)蛋白的磷酸化水平，以及活化后转位至细胞核的核转录蛋白(NF-kB)水平，因此我们推断，索拉胶可能通过对JNK、ERK以及NF-κB蛋白磷酸化的抑制作用，影响下游基因的表达。实验结果表明索拉胶预处理对小鼠D-GalN/LPS诱导的急性肝损伤有很好的保护作用。
　　小鼠经尾静脉注射黑色素瘤细胞，建造黑色素瘤肺转移模型。索拉胶能够显著降低小鼠肺表面和肺组织内的黑色素瘤数量，且抑制作用呈剂量相关性。索拉胶处理能够促进脾脏细胞增殖，并且经索拉胶处理的小鼠脾脏中TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA水平明显升高。细胞实验中，索拉胶浓度在0～100μg/mL范围内对B16F10细胞的生长都没有影响，对黑色素瘤无细胞毒性。索拉胶使巨噬细胞TNF-α和IL-1β的mRNA含量显著提高，呈剂量依赖性。并且索拉胶能诱导巨噬细胞分泌大量TNF-α和IL-1β，呈时间相关性。实验证明索拉胶是通过对脾脏和巨噬细胞的免疫活化来发挥其抗肿瘤作用的，索拉胶对黑色素瘤的转移有很好的抑制效果。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 D半乳糖胺／脂多糖(D-GaIN／LPS)诱导的急性肝损伤

1．1．1 D-GaIN／LPS肝损伤模型

1．1．2 脂多糖诱导肝损伤机制

1．2 黑色素瘤研究及治疗进展

1．2．1 黑色素瘤发病机理

1．2．2 黑色素瘤治疗进展

1．3 索拉胶多糖及其研究进展

1．3．1 β-葡聚糖

1．3．2 索拉胶的生物活性

1．4 课题研究的意义、内容和方法

2 索拉胶对脂多糖诱导肝损伤的保护作用

2．1 实验材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验方法

2．2 结果与讨论

2．2．1 索拉胶处理对D-GaIN／LPS引起小鼠死亡的影响

2．2．2 索拉胶预处理可降低D-GaIN／LPS模型小鼠血清中转氨酶活性

2．2．3 索拉胶预处理对D-GaIN／LPS模型小鼠肝脏病理学影响

2．2．4 索拉胶预处理可抑制D-GaIN／LPS导致的小鼠炎症反应

2．2．5 索拉胶可抑制LPS刺激的巨噬细胞RAW264．7的炎症反应

2．2．6 索拉胶对LPS刺激RAW264．7细胞导致的JNK、ERK和NF-κB活化有抑制作用

2．3 本章小结

3 索拉胶抗黑色素瘤作用

3．1 实验材料与方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验仪器

3．1．3 实验方法

3．2 结果与讨论

3．2．1 索拉胶可抑制小鼠肺部黑色素瘤转移

3．2．2 索拉胶对小鼠黑色素瘤转移模型的病理学影响

3．2．4 索拉胶对小鼠体重、胸腺指数和脾脏指数的影响

3．2．5 索拉胶对脾脏细胞因子基因表达的影响

3．2．6 索拉胶对巨噬细胞RAW264．7免疫活性的影响

3．3 本章小结

4 结论与展望

4．1 研究小结

4．2 本文创新点

4．3 本课题的发展趋势

致谢

参考文献

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