酶法水解DNA制备5’-脱氧核甘酸的研究

摘要

脱氧核苷酸在临床上主要用于医治白血球细胞减少症,对再生障碍性贫血、血小板减少、肝炎等病症也有较好的疗效。广泛应用的生物工程试剂脱氧核苷三磷酸是脱氧核苷酸通过酶催化磷酸化得到的,由脱氧核苷酸酶水解脱氧核苷酸得到的2′一脱氧核苷是合成脱氧核苷类药物的重要原料。核酸酶P1(EC3.1.30.1)是一种含锌金属酶,由桔青霉(Penicilliumcitrinum)发酵制得,可以水解RNA和热变性DNA的磷酸二酯键而得到5′-核苷酸和5′-脱氧核苷酸。用核酸酶P1催化水解热变性DNA制取脱氧核苷酸是制备这类药物的有效方法之一。国内对用酶水解热变性DNA制备5′-脱氧核苷酸的研究报道自70年代开始。但迄今为止,国内对热变性DNA的水解或脱氧核苷酸的应用基础研究的报道也只有寥寥几篇,而且对脱氧核苷酸还没有实现规模化制备。因此本文研究离子注入对产核酸酶P1的桔青霉菌株的改良作用,提高核酸酶的活力,从而进一步提高水解得率,降低副产物的产生,从而降低生产成本。同时研究核酸酶P_1对热变性的DNA的酶解过程并优化其工艺条件,为以后的脱氧核苷酸的工业开发应用工作做准备。

目录

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第一章 文献综述

第二章 实验材料与方法

第三章 核酸酶P1生产菌株的离子注入诱变

第四章 核酸酶P1催化热变性DNA水解的研究

第五章 结论与展望

成果

致谢