Ki67基因启动子克隆及其核心功能区域鉴定

摘要

目的: 克隆Ki67基因启动子并鉴定其核心功能区域的活性及肿瘤特异性。 方法: 以EcoR I酶过度酶切的肾癌Ketr-3细胞基因组DNA为模板，使用PCR的方法获取Ki67基因5'侧翼序列，测序正确后插入pGL3-Basic载体。使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性及肿瘤特异性。使用缺失分析法分别从Ki67基因5'侧翼的5'端和3'端逐段缺失，克隆得到不同长度的截短片段，插入pGL3-Basic载体，使用双荧光素酶检测系统定位Ki67基因启动子核心功能区域，鉴定其启动子活性及肿瘤特异性。 结果: 克隆到的Ki67基因5'侧翼序列与Genbank中记录完全一致，其启动子活性在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞四种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0％、31.1％、23.9％和7.2％；在人正常Huvec细胞内仅为0.5％。自5'端缺失的截短片段其活性表现为先升高后降低，在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞内，-223～+771截短片段的活性达到峰值，分别为SV40 promoter/enhancer活性的18.2％、56.5％、44.1％和13.2％；自3'端缺失的截短片段均表现出较缺失前更强的启动子活性，-223～+30截短片段的活性在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞内分别为-223～+771截短片段活性的2.9倍、2.6倍、2.4倍、2.7倍，亦比hTERT启动子及Survivin启动子活性强。 结论: 首次克隆出Ki67基因启动子(-820～+771)，其特点为富含GC，无TATA盒和CAAT盒；鉴定出-223～+30区域为启动子核心功能区域，该区域具有很强的启动子活性及一定的肿瘤特异性；-820～-427和+31～+771区域存在潜在的抑制性元件，对Ki67启动子有不同程度的抑制作用；转录起始点的有无对Ki67启动子的活性影响不大。

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材料与方法

1 材料

2方法

结果

讨论

结论

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参考文献

综述 细胞增殖相关抗原与泌尿系肿瘤的关系

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

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