莫西沙星浓度依赖性干扰大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位水平

摘要

目的：观察莫西沙星对气道平滑肌细胞(ASMCs)线粒体膜电位(mitochondrialmembrane potential，△Ψm)、增殖及凋亡的影响，探讨莫西沙星抑制ASMCs增殖及促进其凋亡的可能机制。
　　 方法：体外培养大鼠ASMCs;将体外培养的大鼠ASMCs于浓度为0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml（分别为空白对照组、M10组、M20组、M30组、M40组）的莫西沙星中孵育11d，MTT法监测吸光值，计算细胞抑制率，同时用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测ASMCs△Ψm变化；不同浓度莫西沙星（0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、200μg/ml）（分别为空白对照组、M40组、M80组、M120组、M200组）作用于ASMCs48h后，Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率，用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化，Western-blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。
　　 结果：10-40μg/ml莫西沙星作用于ASMCs11d，明显抑制细胞增殖，使ASMCs△Ψm去极化，均存在浓度依赖性(r=0.932，P＜0.01；r=-0.991，P＜0.01)，各组细胞增殖抑制率与△Ψm水平呈负相关(r=-0.924，P＜0.01)；40-200μg/mL莫西沙星作用于ASMCs48h后，与空白对照组相比，各莫西沙星浓度组细胞凋亡明显(P＜0.01)，并存在浓度依赖性(r=0.974，P＜0.01)；荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主，随着莫西沙星浓度增大，红色/绿色荧光强度值比率降低(r=-0.964，P＜0.01)，提示线△Ψm下降；Western-blot检测显示，空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达，干预组随着莫西沙星浓度增加，Caspase-3蛋白表达增加(r=0.979，P＜0.01)，各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关(r-0.887，P＜0.01)，与凋亡蛋白Caspase-3呈正相关(r=0.959，P＜0.01)。
　　 结论：莫西沙星可能通过影响△Ψm抑制ASMCs增殖及促进其凋亡。

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材料与方法

1 材料

2 方法

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结果

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结论

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