抑制IKKβ表达对缺氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞炎症介质表达的影响

摘要

目的：探讨以IKKβ作为治疗靶点，研究IKKβ特异性siRNA干扰其表达对缺氧诱导的炎症介质表达的影响。
　　 方法：以氯化钴(CoCl2)作为化学缺氧诱导剂，加入DMEM细胞培养基模拟缺氧环境，将IKKβ特异性siRNA转染入细胞，用EMSA技术检测NF-κB活性。分别采用qRT-PCR， Western blot, ELISA及流式细胞仪技术检测转染前后NRK52E细胞中IKKβ mRNA和蛋白质表达的变化、诱导缺氧后下游炎症因子白介素-18(IL-18)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)mRNA和蛋白表达的变化以及细胞凋亡情况。
　　 结果：荧光显微镜检测siRNA的转染效率达96.4％，NRK52E细胞在正常情况下可表达IKKβ。转染siRNA后IKKβ在mRNA及蛋白水平的表达与未转染相比显著降低（P＜0.05），NF-1B活性与对照组相比显著降低(P＜0.05)。肿瘤坏死因子(TNF-α)（10ng/ml）或CoCl2(100μmol/L)能促进肾小管上皮细胞分泌IL-18和NGAL，并呈时间效应关系。预转染siRNA的氯化钴诱导组IL-18和NGAL的表达量较单纯氯化钴诱导组分别在mRNA水平及蛋白水平均有所减少，提示在NRK52E细胞中靶向IKKβ的siRNA可降低由氯化钴诱导的IL-18和NGAL的表达，预转染siRNA能够减少了CoCl2诱导的细胞死亡。
　　 结论：TNF-α或CoCl2可诱导大鼠肾小管上皮细胞表达具有生物学活性的IL-18和NGAL。通过siRNA下调IKKβ可抑制IKKβ/NF-κB介导的肾损伤标志物IL-18和NGAL的转录及表达，并可减少CoCl2诱导的细胞死亡。IKKβ特异性siRNA对大鼠肾小管上皮细胞缺氧损伤有一定的保护作用。

目录

文摘

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前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

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参考文献

综述 IL-18、NGAL与肾脏疾病

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致谢