实验性自身免疫性重症肌无力小鼠滤泡辅助性T细胞的表达及其与自身抗体的相关性研究

摘要

目的：研究实验性重症肌无力(EAMG)小鼠体内Tfh表型(CD4+CXCR5+T)细胞群变化以及相关分子Bcl-6和IL-21的表达情况，探讨Tfh细胞在MG发病中的作用，并分析Tfh表达与自身抗体产生的相关性。
　　方法：1、首先建立EAMG模型。准备30只C57BL/6J小鼠，雌性，6-8周，体重18-25g，SPF级，随机分为:完全弗氏佐剂组(n=12); EAMG组(n=12);以20μg tAchR溶于100μl生理盐水(NS)中，然后与100μl等体积CFA充分混匀，制成抗原乳剂，分别于C57BL/6小鼠的双后肢足垫处以及双肩部的皮下分别注射50μl抗原乳剂，建立EAMG小鼠模型。CFA组仅注射等体积NS与CFA的混合乳剂。然后初次免疫后第30天和第60天进行重复免疫一次，每天观察EAMG/CFA小鼠临床评分的变化。免疫后第30，50，70天分别对EAMG组和CFA组小鼠进行尾静脉采血，ELISA检测血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量以及相关分子IL-21的表达。并且进行血清抗AChR抗体总IgG与血清IL-21表达的相关性分析。2、初次免疫后90天，处死小鼠，ELISA检测血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量以及Tfh相关分子IL-21的表达;流式检测外周血、淋巴结及脾细胞CD4+CXCR5+T细胞的比例;对脾细胞、淋巴结细胞进行磁珠分选，选出CD4+T细胞，提蛋白，Western-blot检测CD4+T细胞中Bcl-6的表达;进行外周血、淋巴结、脾脏CD4+CXCR5+T细胞比例与血清抗AChR抗体总IgG、IL-21的相关性分析。
　　结果：1、在整个过程中，CFA组小鼠无明显症状，临床评分一直在0.5分以下;EAMG组小鼠在免疫后第60天临床评分逐渐上升，并在第80天（疾病高峰期）与CFA组有显著差异(P＜0.01);2、与CFA组相比，EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量在第30天时均无明显增高，第50天EAMG组小鼠血清抗AChR抗体IgG1，IgG2b含量显著增高(p＜0.01)，第70天EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量显著增高(p＜0.01)。3、与CFA组相比，EAMG组小鼠血清IL-21水平在第30，50天时均无明显增高，第70天EAMG组小鼠血清IL-21水平显著增高(p＜0.001)。4、第90天处死小鼠，与CFA组相比，EAMG组小鼠血清中IL-21的表达以及抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c的含量均显著增高(p＜0.01)。5、与CFA组相比，EAMG组小鼠外周血、淋巴结、脾脏CD4+CXCR5+T细胞的比例显著升高(p＜0.001);6、与CFA组相比，EAMG组小鼠淋巴结、脾脏中CD4+T细胞的Bcl-6表达也显著升高(p＜0.001)。7、初次免疫后第30、50天，EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG与血清IL-21的表达无相关性(r=0.430，p=0.162)（r=0.315，p=0.319），第70、90天两者呈正相关（r=0.629，p=0.029）(r=0.748，p=0.033)。第90天，脾脏CD4+CXCR5+T细胞百分比分别与IL-21、IgG的表达均呈正相关(r=0.719，p=0.045)(r=0.793，p=0.019)，淋巴结CD4+CXCR5+T细胞百分比分别与IL-21、IgG的表达均呈正相关(r=0.833，p=0.010)（r=0.721，p=0.043），外周血CD4+CXCR5+T细胞百分比与IL-21呈正相关(r=0.798，p=0.018)，与IgG无相关性(r=0.606，p=0.111)。
　　结论：1.EAMG的发病可能与血清中抗AChR抗体生成有关。2.Tfh可能Tfh可能通过促进血清中抗AChR抗体的生成，参与EAMG发病。3.IL-21及Bcl-6在Tfh的分化中可能起到重要作用。4.调控Tfh的表达可能成为MG免疫治疗靶点之一。

目录

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摘要

论文说明

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

滤泡辅助性T细胞(Tfh)与自身免疫性疾病的研究进展 综述

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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