间充质干细胞对系统性红斑狼疮的免疫调节作用

摘要

目的：探讨体外人间充质干细胞(HMSCs)对系统性红斑狼疮(SLE)的免疫调节作用和小鼠间充质干细胞(mMSCs)联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用。 方法：分别从BAIJB/c小鼠骨髓和健康人骨髓中分离培养MSCs。(1)用EZ-SepTMMouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞，在ConA诱导的同时，先经LEF处理，洗去LEF后，脾淋巴细胞再和mMSCs共同培养。分组：A组：脾淋巴细胞；B组：脾淋巴细胞+mMSCs；C组：LEF处理的脾淋巴细胞；D组：LEF处理的脾淋巴细胞+mMSCs。用MTT比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况，流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况，定量RT-PCR检测各组T淋巴细胞的IL-2、IL-10 mRNA水平。(2)在PHA刺激下，SLE患者外周血淋巴细胞与不同数量的HMSCs共同培养。检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况，分析各组T淋巴细胞的IFN-γ,、IL-10、TGF-β1 mRNA水平。(3)分离SLE患者外周血单核细胞，在含rhGM-CSF和rhIL-4的培养条件下制备树突状细胞(DC)。分组：HMSCs处理组、HMSCs未处理组。用流式细胞仪检测各组DC表面CD86、CD83、CDla和HLA-DR的表达，MTT法检测各组DC刺激淋巴细胞增殖的能力。 结果：(1)在体外，mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞的增殖、IL-10mRNA的表达有协同抑制作用。(2)HMSCs对由PHA诱导的SLE患者T淋巴细胞的增殖、凋亡均有抑制作用，且抑制作用与HMSCs呈剂量依赖性。HMSCs能促进SLE患者T淋巴细胞TGF-β1 mRNA的表达，抑制IL-10、IFN-γ mRNA的表达。(3)HMSCs可以影响SLE患者单核细胞来源的DC分化、成熟、具有抑制DC刺激异体淋巴细胞增殖的能力。 结论：(1)mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用；(2)}HMSCs可能通过抑制SLE患者T淋巴细胞增殖、减少T淋巴细胞凋亡、促进T淋巴细胞TGF-p1 mRNA表达、抑制IL-10、IFN-γmRNA表达及影响SLE患者单核细胞来源DC的发育、成熟和功能的途径，下调SLE患者的免疫反应。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:中英文对照表

声明

第一章引言

1.1 MSCs的生物学特性

1.1.1 MSCs的来源与分化

1.1.2 MSCs的表面标志

1.1.3 MSCs的多器官归巢能力

1.1.4 MSCs具有低免疫原性

1.1.5 MSCs能够在宿主体内存活并诱导免疫耐受

1.1.6 MSCs具有抗原递呈细胞的作用

1.2 MSCs对免疫细胞的调节作用

1.2.1 MSCs对T淋巴细胞的调节作用

1.2.2 MSCs对B淋巴细胞的免疫调节作用

1.2.3 MSCs对其它免疫细胞的调节作用

1.3 MSCs在SLE中的应用前景

1.3.1 SLE的发病与免疫紊乱

1.3.2 MSCs移植与SLE

第二章mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果

2.2.1 mMSCs的分离培养及鉴定

2.2.2 mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞体外诱导增殖的影响

2.2.3 mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞CD69、CD28表达的影响

2.2.4 mMSCs联合LEF对T淋巴细胞凋亡的影响

2.2.5 mMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞IL-2、IL-10 mRNA表达的影响

2.3讨论

2.4小结

第三章HMSCs对SLE患者T淋巴细胞的免疫调节作用

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果

3.2.1 HMSCs的分离培养及鉴定

3.2.2 HMSCs对SLE患者T淋巴细胞体外诱导增殖的影响

3.2.3 HMSCs对SLE患者T淋巴细胞早期凋亡的影响

3.2.4 HMSCs对SLE患者T淋巴细胞IFN-γ、IL-10、TGF-β1 mRNA表达的影响

3.3讨论

3.4小结

第四章HMSCs对SLE患者外周血单核细胞来源树突状细胞免疫功能的影响

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果

4.2.1 HMSCs不能被诱导分化为DC

4.2.2 DC的鉴定

4.2.3 HMSCs抑制SLE患者单核细胞来源的DC的分化

4.2.4 HMSCs抑制SLE患者单核细胞来源DC的成熟

4.2.5 HMSCs抑制SLE患者单核细胞来源成熟DC刺激的同种异体淋巴细胞增殖

4.3讨论

4.4小结

第五章主要结论和展望

5.1主要结论

5.2展望

参考文献:

致谢

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