积雪草酸对糖尿病大鼠肾脏Nrf2-ARE信号通路的影响

摘要

目的:观察糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)大鼠经积雪草酸(asiaticacid，AA)干预后，对Nrf2-ARE信号通路、肾脏组织转化生长因子-β1（transforminggrowthfactor-betal，TGF-β1）及细胞外基质的影响，探讨其对抗糖尿病肾病的可能机制。
　　 方法:链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导糖尿病大鼠模型，将糖尿病大鼠随机分为5组:①糖尿病肾病组（DN组）②低剂量AA组(AA1组)③中剂量AA组（AA2组）④高剂量AA组（AA3组）⑤α-硫辛酸(α-lipoicacid，α-LA)干预组（α-LA组），并以正常组(NC组)作对照。连续干预4、8及12周后观察各组大鼠血糖(Bloodglucose，BG)、血尿素氮(bloodureanitrogen，BUN)、血肌酐(serumcreatinine，SCr)及尿白蛋白排泄率(urinaryalbuminexcrectionrate，UAER);通过光镜及电镜下观察肾脏在病理形态学上的改变;检测大鼠肾脏皮质中丙二醛(malondiadehyde，MDA)的含量及超氧化物岐化酶(superoxidedismutase,SOD)的活性;通过Westernblot法对肾组织中NF-E2相关因子(Nrf-2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)的表达进行检测。
　　 结果:
　　 1.4周、8周及12周末DN组大鼠BG、BUN、SCr及UAER与NC相比均显著升高（均P＜0.05）;伴随AA用量的逐渐升高，AA1组、AA2组、AA3组BUN、SCr、UAER都出现逐渐下降的趋势;AA3组与α-LA干预组相比，无统计学意义。
　　 2.光镜显示:8周末DN组出现肾小球的体积明显增大，细胞外基质出现增生，系膜细胞数量明显增多;透射电镜显示:DN组的足突出现了增宽并同时伴有节段性的融合，肾小球基底膜显示明显增厚，系膜基质增多;伴随AA剂量的上升，上述所观察到的异常出现逐渐改善趋势;4周末上述病理表现在DN组较轻，各治疗组与DN组相比，无明显改善;12周末上述病理表现在DN组进一步加重，各治疗组与DN组相比，有改善趋势。
　　 3.4周、8周及12周末，与NC相比，DN组大鼠MDA含量显著升高(均P＜0.05)，SOD的活性显著下降(P＜0.05);与DN组相比，随着AA剂量的增加，AA1组、AA2组、AA3组MDA水平呈下降趋势、SOD活性呈上升趋势;AA3组与α-LA干预组相比，无统计学意义。
　　 4.4周、8周及12周末，DN组大鼠Nrf2蛋白的表达增加，与同期NC组相比，差异有显著性(P＜0.05);与DN组相比，随着AA干预剂量的增加，AA1组、AA2组、AA3组Nrf2有上升趋势。AA3组Nrf2蛋白的表达与α-LA干预组相比，无统计学意义。
　　 5.4周、8周及12周末，DN组大鼠HO-1蛋白的表达下降，与同期NC组相比，差异有显著性(P＜0.05);与DN组相比，随着AA干预剂量的增加，AA1组、AA2组、AA3组HO-1有上升趋势。AA3组HO-1蛋白的表达与α-LA干预组相比，无统计学意义。
　　 6.4周、8周及12周末，DN组大鼠TGF-β1、FN、Col-Ⅳ蛋白的表达上升，与同期NC组相比，差异有显著性(P＜0.05);与DN组相比，随着AA干预剂量的增加，AA1组、AA2组、AA3组TGF-β1、FN、Col-Ⅳ有下降趋势。AA3组HO-1蛋白的表达与α-LA干预组相比，无统计学意义。
　　 结论:积雪草酸通过激活Nrf2-ARE信号通路，下调肾脏细胞TGF-β1表达及减少细胞外基质沉积，发挥其对抗糖尿病肾病的作用。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 前言

1．2 选题的意义、研究内容和技术路线

1．2．1 选题的意义

1．2．2 研究内容

1．2．3 技术路线

第二章 积雪草酸对糖尿病大鼠肾脏Nrf2-ARE信号通路的影响

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．1．4 常规试剂的配置

2．2 方法

2．2．1 建立糖尿病大鼠的模型

2．2．2 收集标本

2．2．3 大鼠各项指标的检测

2．2．4 大鼠肾组织切片

2．2．5 检测肾组织MDA含量及SOD酶活性

2．2．2．6．Western blot法检测肾脏Nrf-2、HO-1、TGF-β1、FN、Col-Ⅳ蛋白的表达

2．3 结果

2．3．1 观察大鼠一般状况

2．3．2．各组血糖状况

2．3．3 各组血BUN、SCr、UAER状况

2．3．4 大鼠肾组织切片

2．3．5 检测肾组织MDA含量及SOD酶活性

2．3．6 各组大鼠肾脏Nrf2、HO-1、TGF-β1、FN、Col-Ⅳ蛋白的表达变化

2．4 讨论

第三章 研究总结与展望

3．1 研究总结

3．2 研究展望

参考文献

英文缩写索引

综述

致谢

攻读学位期间发表文章情况