α7-烟碱型乙酰胆碱受体在肺腺癌细胞株A549增殖、迁移和凋亡的作用

摘要

目的:探讨α7-烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor，nAChR)在人肺腺癌细胞株A549增殖、迁移和凋亡的作用。
　　方法:蛋白印迹法检测α7亚基型烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholinereceptor，α7-nAChR)在不同肺癌细胞株中的表达，筛选出α7-nAChR稳定高表达细胞株，作为α7-nAChR在肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的作用研究的细胞株;将对数生长期的A549随机分成如下3组:空白对照组、激动剂（溴化乙酰胆碱）组、拮抗剂（甲基牛扁亭碱）组，加入不同浓度梯度的激动剂、拮抗剂，分别作用A549细胞24、48、72h; MTT筛选出nAChR激动剂和拮抗剂对细胞增殖促进和抑制的最佳浓度和时间点;将对数期A549细胞随机分为3组:（空白对照组、激动剂组、拮抗剂组），MTT筛选出的最佳的浓度作用最佳时间作用A549后，分别用RT-PCR法和免疫荧光法检测α7-nAChR的表达;MTT实验检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验和transwell实验检测各组细胞迁移情况;Tunel检测凋亡情况，蛋白印迹法检测caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2表达。
　　结果:A549、SCLC和LA795三种细胞生长曲线提示:48h和72h为对数生长期细胞大量增殖;RT-PCR和Western blotting示人肺腺癌A549株稳定高表达α7-nAChR; MTT示:与对照组相比，10-3mol/Lα7-nAChR拮抗剂作用A549细胞株48h后能够明显抑制细胞的增殖(P＜0.01)，10-3mol/Lcα7-nAChR激动剂作用A549细胞48h后细胞增殖明显(P＜0.01); RT-PCR和免疫荧光示:α7-nAChR在三组均不同程度的表达，与对照组相比，激动剂组α7-nAChR表达稍增强，拮抗剂组α7-nAChR表达者明显减弱;划痕试验示:拮抗剂抑制A549细胞迁移，相反激动剂促进迁移;Transwell试验示:对照组穿膜细胞数为39.3±4.0(SP×200)，拮抗剂组穿膜细胞数为25.5±3.8(SP×200)，激动剂组穿膜细胞数为68±5.5(SP×200)，激动剂组和拮抗剂组分别于对照组比较差异均有显著统计学意义(p＜0.01); Tunel示:α7-nAChR拮抗剂组细胞凋亡较对照组多，明显促进细胞的凋亡，α7-nAChR激动剂组与对照组无细胞凋亡;Western blotting检测凋亡相关蛋白示:拮抗剂组促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达较对照组明显增加，而抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。
　　结论:α7-nAChR与肺腺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡密切相关。拮抗剂下调α7-nAChR表达，肺腺癌A549的增殖和迁移明显抑制，凋亡明显增强，且凋亡可能与α7-nAChR拮抗剂激活机体的Bax/Bcl-2和caspase家族有关。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 肺癌研究概况

1．1．2 烟碱样乙酰胆碱受体

1．1．3 烟碱样乙酰胆碱受体激动剂

1．1．4 烟碱样乙酰胆碱受体拮抗剂

1．2 研究目的及意义、内容及技术路线

1．2．1 研究目的及意义

1．2．2 研究内容

1．2．3 研究技术路线

第二章 肺癌细胞株的培养及α7-nAChR受体表达检测

2．1 实验材料

2．1．1 细胞株

2．1．2 试剂

2．1．3 主要设备和器材

2．1．4 主要试剂及其配置

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养

2．2．2 Western blotting法测定α7-nAChR受体在不同肺癌细胞株中的表达

2．3 统计学处理

2．4 实验结果

2．4．1 细胞培养

2．4．3 Western blotting法检不同肺癌细胞株中α7-nAChR蛋白表达

2．5 讨论

第三章 α7-nAChR激动剂和拮抗剂对肺腺癌A549细胞功能的研究

3．1 α7-nAChR受体激动剂和拮抗剂对肺癌细胞增殖的影响

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验方法

3．1．3 实验结果

3．1．4 讨论

3．2 α7-nAChR受体激动剂和拮抗剂对受体表达的影响

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验方法

3．2．3 实验结果

3．2．4 讨论

3．3 α7-nAChR受体激动剂和拮抗剂对肺癌细胞迁移能力的影响

3．3．1 实验材料

3．3．2 实验方法

3．3．3 实验结果

3．3．4 讨论

3．4 α7-nAChR受体激动剂和拮抗剂A549凋亡的影响

3．4．1 实验材料

3．4．2 实验方法

3．4．3 实验结果

3．4．4 讨论

第四章 总结和展望

总结

展望

参考文献

综述 α7烟碱型乙酰胆碱受体的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文目录