Foxp3+调节性T细胞在结直肠癌中表达的意义及在CIK细胞培养中的变化研究

摘要

目的：
　　探究Foxp3+Treg在结直肠癌组织、正常组织中的表达情况；分析癌组织中Foxp3+Treg表达水平的高低和临床参数的关系；评估Foxp3+Treg检测的临床意义。研究CIK细胞诱导过程中CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达情况。初步探讨IFN-γ对iTreg分化的影响。为以后针对Treg的临床治疗提供理论基础与实验支撑。
　　方法：
　　运用免疫组织化学染色方法检测结直肠癌组织、正常组织以及BALB/c小鼠移植肿瘤组织中Foxp3+Treg的表达情况。运用流式分析术测定CIK细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg、BALB/c小鼠移植肿瘤组织中TIL等细胞表型。运用流式分选术分选出CIK细胞中CD4+CD25high群体；分选出野生型BALB/c小鼠脾脏中CD4+CD25-细胞。运用细胞增殖抑制实验测定CD4+CD25high细胞对PBMC增殖的影响。
　　结果：
　　结直肠肿瘤组织中有Treg存在，绝大部分Foxp3+Treg位于癌旁基质中，肿瘤血管周围Foxp3+Treg表达较高。癌组织中Foxp3+Treg的表达明显高于正常组织(P<0.01)。有淋巴结转移的患者癌组织中Foxp3+Treg的表达水平高于未转移者(P=0.014)。有远处转移的患者癌组织中 Foxp3+Treg的表达水平高于未转移者(P=0.043)。男性患者癌组织中Foxp3+Treg的表达水平高于女性(P=0.034)。随着结直肠肿瘤TNM分期进展，Foxp3+Treg表达水平高的患者比例在增高。Foxp3+Treg高表达组与Foxp3+Treg低表达组患者的总生存率(overall survival rate，OSR)差异没有显著性(P=0.212)。转移组患者的总生存率明显低于未转移组(P<0.01)。CIK细胞培养过程中，CD3+CD8+细胞呈逐渐上升趋势。CD3+CD4+细胞第1天至第5天逐渐上升、第5天达到高峰值、随后呈逐渐下降趋势。CD4+CD25+Foxp3+Treg第1天(0.30±0.15)％、第3天(4.48±1.72)%达到高峰、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%呈逐渐下降趋势。第14天时CD4+CD25+Foxp3+Treg高表达TGF-β1(97.2±2.1)%、CTLA-4(96.2±3.5)%，低表达IL-10(4.2±2.3)%。CD3+CD4+CD25high Treg细胞并不抑制 PBMC的增殖。IFN-γ对小鼠 iTreg体外诱导影响实验中，IFN-γ干扰组Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例相对iTreg诱导组明显更低(P<0.001)。IFN-γ对小鼠iTreg体内诱导影响实验中，第15天时IFN-γ治疗组较NS对照组移植肿瘤体积要小(P<0.05)；BALB/c小鼠移植肿瘤TIL中，IFN-γ治疗组Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例相对NS对照组更低(P<0.043)。
　　结论：
　　结直肠肿瘤组织中 Foxp3+Treg的表达水平明显高于正常组织。有淋巴结转移、远处转移的结直肠癌组织中 Foxp3+Treg的表达水平高于未转移者。随着肿瘤恶性程度的进展， Foxp3+Treg表达水平高的患者比例在增高。癌组织中Foxp3+Treg表达水平的高低尚不能预测结直肠癌患者的预后，但生存曲线直观显示Foxp3+Treg高水平表达组的总生存率有低于Foxp3+Treg低水平表达组的趋势。结直肠癌患者有转移组的总生存率明显低于未转移组。CIK细胞诱导过程中会产生少量的CD4+CD25+Foxp3+Treg。第14天时比例约为1%。CD4+CD25+Foxp3+Treg可以作为CIK细胞质量控制指标。IFN-γ可能抑制iTreg细胞的分化。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 调节性T细胞

1.2叉头状转录因子Foxp3

1.3 结直肠癌调节性T细胞的研究现状

1.4 肿瘤微环境和肿瘤免疫治疗

1.5细胞因子诱导的杀伤细胞

1.6 科学问题的提出

第二章 研究的目的、方法、实验设计方案、意义

2.1 研究目的

2.2 研究方法

2.3 实验设计方案

2.4研究意义

第三章 Foxp3+调节性T细胞在患者结直肠癌组织中的表达及其临床意义

3.1 材料与仪器

3.2 方法

3.3 结果

3.4讨论

第四章 CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达

4.1 材料与仪器

4.2 方法

4.3 结果

4.4讨论

第五章 IFN-γ对小鼠iTreg体外诱导影响的初步研究

5.1 材料与仪器

5.2 方法

5.3结果

5.4讨论

第六章 IFN-γ对小鼠iTreg体内诱导影响的初步研究

6.1 材料与仪器

6.2 方法

6.3结果

6.4讨论

第七章 结论与展望

7.1结论

7.2展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加的会议