河蚬多糖的制备、理化特性及对急性酒精性肝损伤的保护作用

摘要

酒精性肝损伤（Alcoholic liver damage, ALD）是因饮酒过量导致的肝脏疾病，已成为危害人们健康的焦点问题之一。多糖具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性，是一类重要的生理活性物质。本研究以河蚬（Corbicula fluminea）为原料，通过酶预处理辅助三相分离法（TPP）制备河蚬多糖（PSP），利用响应面优化试验，获得最佳提取工艺参数。以酶法制备的河蚬多糖（E-PSP）为参照，对比性研究河蚬多糖的理化性质和体外抗氧化活性，确定高活性河蚬多糖。在此基础上，建立急性酒精性肝损伤小鼠模型，研究河蚬多糖对急性酒精性肝损伤的保护作用，并初步揭示其氧化应激的作用机制。主要研究结果如下： （1）利用酶预处理辅助三相分离法提取河蚬多糖（PSP）并通过单因素试验和响应面试验对其提取条件进行优化。研究表明，得到PSP最佳提取条件为：硫酸铵质量分数15.74%（w/v），叔丁醇与酶解液体积比1.4:1.0（v/v），时间30 min，温度37.10℃，此时，河蚬多糖的提取率为9.18 ± 0.37%。 （2）对比性研究PSP和E-PSP的理化性质和体外氧化活性。结果表明：与E-PSP相比，PSP的提取率（9.18%）和多糖含量（81.71%）分别提高了20.63%和1.84%，提取时间从原来的14 h极大地缩短为0.5 h，且PSP具有较低的可溶性蛋白质含量。PSP和E-PSP具有相同的单糖组成，不同的分子摩尔比；PSP和E-PSP均为蛋白聚糖且基本化学结构特征相似；PSP和E-PSP均由高分子量组分和低分子量组分构成，但PSP的低分子量组分比E-PSP的低分子量组分含量高得多。PSP的清除自由基能力和体外抗氧化活性明显高于E-PSP。 （3）利用50%乙醇持续灌胃建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，综合评价PSP对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用。研究表明，与模型组相比，经PSP灌胃的小鼠肝脏指数降低，胸腺和脾脏指数有显著提高。PSP能有效降低谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的活性和甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量，提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活力和谷胱甘肽（GSH）的含量。 （4）PSP对小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用，其作用机制可能为PSP能够调控乙醇代谢过程中的关键酶，特别是抑制了细胞色素P4502E1 （CYP2E1）的表达，避免了酒精对肝脏的损伤。同时，PSP能激活血红素氧合酶-1（HO-1）的表达，增强机体的抗氧化能力，缓解乙醇代谢引发的脂质过氧化作用，避免肝细胞结构遭到破坏。

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