人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/MDR的建立及其生物学特性的初步研究

摘要

肿瘤多药耐药是导致临床肿瘤化疗失败的主要原因之一，肿瘤多药耐药模型的建立及其性质的研究，对肿瘤治疗的顺利进行具有十分重要的意义。本论文主要通过建立肿瘤多药耐药模型，测定其较为完备的耐药谱，并对其各项生物学特性与亲本细胞进行比较，一方面为临床用药提供参考，同时也为从分子水平分析耐药细胞的各项机制提供依据。 本课题首先采用低浓度加量持续诱导法建立人乳腺癌MCF-7细胞的耐阿霉素模型，将其命名为MCF-7/MDRa。其主要的生物学特性，包括耐药性、动力学周期分布、表型变化、胞内药物蓄积等，在本实验中作了较为全面和深入的研究。结果表明，MCF-7/MDRa对多种癌症化疗药物具有良好的抗性；MCF-7/MDRa细胞较亲本细胞的ADM半数致死浓度(IC50)高500倍，撤药培养150天后耐药倍数仍维持在200倍以上。通过CEC-LIF法，在稳定生长的撤药培养6天的细胞中可以检测到ADM的蓄积。 采用单一药物诱导建立耐药细胞后，选用14种不同的化疗药对MCF-7/MDRa细胞进行多药耐药性的鉴定。MCF-7/MDRa细胞对其中的9种药物产生了3.06～127.07倍的交叉耐药，说明MCF-7/MDRa细胞是多药耐药的。 耐药细胞分化程度低于同步传代的MCF-7/S细胞，对营养要求降低，细胞倍增时间与亲本细胞接近，S期细胞显著增加，G1期细胞减少；随着撤药时间的延长，细胞的增殖速度加快。采用免疫组织化学法测定细胞耐药前后各相关蛋白的表达变化发现耐药细胞P-gp和GSTπ的表达水平较亲本细胞有显著增加，ER阳性表达丢失；通过流式细胞术发现MCF-7/MDRa中侧群细胞的含量高于亲本细胞。 本实验所建立的MCF-7/MDRa模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性，可用于肿瘤多药耐药机制的研究，各项实验结果提示耐药细胞中可能存在两种亚克隆，即：先天性多药耐药细胞MCF-7/I和获得性多药耐药细胞MCF-7/MDR。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章绪论

第二章阿霉素诱导人乳腺癌细胞MCF-7耐药模型的建立

第三章阿霉素诱导的耐药细胞多药耐药性的鉴定

第四章MCF-7/S和MCF-7/MDRa细胞生物学特性的研究

第五章总结与展望

参考文献

硕士期间已发表的论文

致谢