刀额新对虾主要致敏原的分离纯化与鉴定

摘要

食物过敏作为一类食源性疾病已引起了人们的普遍关注。过敏性疾病已被世界卫生组织列为二十一世纪重点防沫的三大类疾病之一，是当前世界性的重大卫生学问题。食物过敏作为一类常见的过敏性疾病，引起的临床症状主要有头晕、头痛、胸闷、恶心、呕吐、皮肤痉痒等，严重时还会休克甚至死亡。因此，开展食物(特别是海产品)的过敏原研究对保护人们生命健康，提高人民生活质量具有巨大的经济效益和社会效益。 虾蟹等甲壳类动物及其制品是人类优质动物蛋白的来源之一，也是八大类容易引起过敏的食物之一。随着国际贸易的发展，其在食品中的应用越来越广泛，食用虾引起过敏的潜在危害更值得重视。本论文选用我国华南地区常见的食用虾种，刀额新对虾(Metapenaeusensis俗名基围虾)，作为研究对象，主要从虾过敏原蛋白的分离纯化、纯化产物的免疫学鉴定等方面进行研究，得到如下结论： 首先，应用SDS-PAGE技术对粗提蛋白液进行初步分离，SDS-PAGE图谱显示刀额新对虾粗提蛋白约有20条可辨蛋白带，分子量在12.1KDa～105.6KDa之间。利用12例虾过敏患者血清通过免疫印迹(western-blotting)分析，初步鉴定出刀额新对虾粗提液中有7条过敏蛋白条带，其分子量分别为36KDa、46.2KDa、60KDa、64.8KDa、68KDa、78KDa和88.5KDa。另外还有21.6KDa的蛋白也被个别患者的血清识别，其中4条过敏蛋白条带反应率高，为主要致敏组分，分子量分别是36KDa、46.2KDa、60KDa和68KDa，这与国内外其他人的研究结果有一定差异，这可能与虾的种类不同、各地区虾类生长环境的不一致性以及过敏患者人群的个体差异有关。 其次，通过硫酸铵分段盐析、DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶柱层析等方法逐步纯化了虾过敏蛋白。并通过免疫印迹(western-blotting)、斑点酶联免疫(dot-ELISA)、和酶联免疫(ELISA)间接法对已经纯化的虾过敏蛋白进行了分析和鉴定。具有很高的反应性。 本研究初步纯化、鉴定出刀额新对虾主要过敏原蛋白，为进一步研究虾类过敏原的结构与功能奠定了一定的理论基础，其在ELISA检测中作为特异性抗原与虾过敏症患者血清中特异性IgE有良好的反应性，也为虾类食物过敏反应疾病的诊断和进一步研制脱敏试剂奠定了良好的基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1食物过敏与食物过敏原

1.1.1食物过敏

1.1.2食物过敏原

1.2虾过敏原的研究概况

1.2.1国外研究进展

1.2.2国内研究进展

1.3本论文研究意义

1.4本论文主要研究内容和路线

第二章虾致敏蛋白的提取、分离

2.1前言

2.2材料与方法

2.2.1实验仪器

2.2.2试剂及材料

2.2.3主要试剂的配制

2.2.4虾粗提液的制备

2.2.5虾粗提蛋白浓度的测定

2.2.6虾粗提蛋白的SDS-PAGE分析

2.2.7分子量的测定

2.2.8 Western-blotting分析虾蛋白粗提液中的主要致敏组分

2.3结果与讨论

2.3.1刀额新对虾蛋白质的提取与粗提蛋白浓度的测定

2.3.2虾粗提蛋白组分的分析

2.3.3分子量测定的结果

2.3.4虾蛋白组分主要、次要过敏原的初步鉴定

2.3.5讨论

2.4本章小结

第三章虾过敏蛋白的纯化

3.1前言

3.2材料与方法

3.2.1实验材料

3.2.2实验方法

3.3结果与讨论

3.3.1虾过敏蛋白的硫酸铵沉淀

3.3.2虾过敏蛋白的离子交换层析

3.3.3虾过敏蛋白的SephadexG-100凝胶柱层析

3.4本章小结

第四章虾过敏蛋白的免疫学鉴定

4.1前言

4.2材料与方法

4.2.1材料

4.2.2 ELISA检测试剂配制

4.2.3实验方法

4.3结果与讨论

4.3.1 DE-52层析纯化产物对11份过敏症患者血清的ELISA检测结果

4.3.2纯化的虾过敏蛋白的免疫印迹检测结果

4.3.3纯化的虾过敏蛋白的酶联免疫检测结果

4.3.4讨论

4.4本章小结

结论与展望

1、结论

2、展望

致 谢

参考文献

附录：