结核杆菌Ag85A与GM-CSF基因共表达DNA疫苗基础研究

摘要

本研究将GM-CSF编码基因与目的基因构建于同一载体上,依靠GM-CSF的免疫佐剂作用,提高Ag85A基因的免疫效果.本实验成功构建了结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF共同表达载体,然后免疫小鼠,观察共表达质粒的免疫效果,为结核杆菌DNA疫苗的研制提供一种新的思路和方法.本实验分为两个部分:一、结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF共同表达载体的构建、鉴定与蛋白表达目的:构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF共同表达质粒,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略.方法:从结核杆菌H<,37>Rv株基因组DNA中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒plRES上成为pI85A,用PCR方法从pc-GM-CSF质粒中扩增出GM-CSF,构建于pI85A质粒上,成为共同表达质粒pI85AGM.然后转染7721细胞(肝癌细胞),进行蛋白的表达和鉴定.结论:细胞因子GM-CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功,为研制新型结核杆菌DNA疫苗在动物体内免疫效应的研究奠定了基础.二、结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF共同表达载体对小鼠的免疫效果目的:研究结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF共同表达质粒对小鼠的免疫效果,为设计新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的思路.方法:将重组质粒免疫小鼠,通过CTL和NK细胞杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖试验,以及小鼠血清抗体的检测,考察结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF对小鼠的免疫效果.结论:细胞因子GM-CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功,对小鼠有一定的免疫效果,为进一步在动物体内进行保护性效应试验研究提供了条件.

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文摘

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前言

综述结核杆菌DNA疫苗研究近况

第一章重组质粒pI85AGM构建、表达和活性鉴定

1.材料与方法

2.结果

讨论

第二章结核杆菌Ag85A和细胞因子GM－CSF共同表达载体对小鼠的免疫效果

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

结论

参考文献

致谢

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