5-ALA介导的光动力对体内外C6胶质瘤细胞杀伤作用研究

摘要

目的： 探讨5-ALA介导的光动力对体外和颅内种植的C6胶质瘤细胞的杀伤作用。 方法： 试验共分为三个相互联系的部分进行研究。第一部分为体外实验，研究5-ALA介导的光动力对体外培养的C6胶质瘤细胞杀伤作用；第二部分研究动物模型的构建，探讨大鼠C6胶质瘤细胞皮层荷瘤鼠模型的建立方法，为光动力研究提供动物模型；第三部分为动物实验，研究5-ALA介导的光动力对颅内种植的大鼠C6胶质瘤细胞的杀伤作用。体外实验中将C6细胞和5-ALA体外一起培育，激光照射后以MTT法测其成活率，探讨培育时间和5-ALA浓度对其介导的光动力效应的影响。体外试验的结果也将为动物试验提供时间和剂量参考。为了研究5-ALA介导的光动力作用对颅内在体C6胶质瘤的杀伤作用，本实验采用立体定向下建立皮层荷瘤鼠作为动物模型。模型建立后，通过影像学、形态学、免疫组织化学、流式细胞学以及开骨窗及切除肿瘤观察生存期来验证这一模型。在实验第三部分中将上述皮层大鼠胶质瘤模型39只分成PDT组12只，单纯开骨窗组9只，单用5-ALA+开骨窗组9只，开骨窗+激光组9只。各组处理后观察生存状态和生存期，部分大鼠行病理及透射电镜检查，探讨光动力疗法的功效及机理。 结果： 5～ALA与C6细胞共同培育5小时其介导的PDT作用达到最强。5-ALA浓度为0.8mmol/l以上时对细胞的抑制率才能超过50％，5-ALA浓度为3.2 mmol/l时其介导的光动力作用达到了饱和。大鼠C6胶质瘤生物学特性有浸润性生长、新生血管形成的特性，具有GFAP的胶质瘤特异性标志，且建模成功率高，均一性好，可较好地模拟人脑胶质瘤。电镜示PDT组胶质瘤组织可见较多量凋亡，细胞问连接松散，胞膜皱缩、线粒体肿胀，粗面内质网结构模糊等；PDT组大鼠生存期明显大于对照组(P<0.05)。 结论： 通过本实验方法建立的C6细胞大鼠皮层荷瘤模型切实、稳定，开骨窗暴露肿瘤简便，可以很好地满足光动力研究的需要。5-ALA介导的PDT对体外及颅内种植C6细胞都有杀伤作用。除了直接作用导致细胞坏死外，线粒体和细胞的各生物膜损伤诱导细胞凋亡是光动力作用的重要机制。

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前言

第一章 5-ALA介导的光动力作用对体外培养的C6胶质瘤细胞杀伤作用研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第二章 大鼠C6胶质瘤细胞皮层荷瘤鼠模型的建立研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第三章 5-ALA介导的光动力对大鼠颅内种植的C6胶质瘤细胞的杀伤作用

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

致谢

参考文献

附录(英文版)Early photodynamic effect on C6 glioma cells in vitro and in vivo after exoposure to 5-aminolevulinic acid

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后记