人脂肪干细胞分离培养及多向分化潜能的实验研究

摘要

目的：从整形外科脂肪抽吸术病人脂肪中分离培养脂肪基质干细胞,探讨其多向分化潜能。 方法：0.075％I型胶原酶消化脂肪组织并计数,以4×104有核细胞/cm2细胞密度接种,DMEM+10％FBS培养液传代培养至第三至第五代。体外培养并测定第一、二、三代细胞,绘制细胞生长曲线,计算群体倍增时间。取第二代细胞分别向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞诱导14天。向成骨细胞诱导进行茜素红染色、Vonkossa染色、ALP染色、免疫荧光检测与成骨相关蛋白(ONN、OPN、BSP)的表达、RT-PCR检测ONN、OPN、BSP、ALP表达；向软骨诱导免疫荧光检测II型胶原、RT-PCR检测COL II、SOX9、aggrecan表达；向脂肪细胞诱导进行油红O染色、RT-PCR检测leptin、PPAR-γ表达。 结果：第一、二、三代细胞生长稳定,群体倍增时间约60h。向成骨细胞诱导14天,光镜下可见矿化结节形成,茜素红染色、Vonkossa染色显示有钙盐沉积,ALP染色染色阳性,免疫荧光检测显示有ONN、OPN、BSP表达,RT-PCR检测有ONN、OPN、BSP、ALP表达；向软骨细胞诱导14天,免疫荧光检测到有COLII表达、RT-PCR检测到COLII、SOX9、aggrecan表达；向脂肪细胞诱导14天光镜下可以观察到脂滴形成,油红O染色阳性、RT-PCR检测到Leptin、PPAR-γ表达。 结论：脂肪干细胞来源充足,细胞获得量大,体外增殖能力强,具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能,可能成为组织工程的种子细胞的来源。

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文献综述 脂肪干细胞的多向分化潜能及应用前景

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