GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞在裸鼠抗瘤效应研究

摘要

一、GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞及其对NK细胞杀伤活性影响 目的：构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与白细胞介素21(1L-21)基因共表达载体pRSC-GM-CSF-IL21，将其转染人卵巢癌细胞并观察其对NK活性影响。 方法：利用PCR从本室先前构建保存的重组质粒pRSC-IL21中扩增出IL-21基因，再将其插入到另一重组pRSC-GM-CSF质粒中，形成pRSC-GM-CSF-lL21共表达质粒(以酶切与测序鉴定)。用脂质体将pRSC-GM-CSF-IL21以及pRSC-GM-CSF、oRSC-IL21与空质粒pRSC分别转染人卵巢癌细胞系SKOV3，并将各转染的细胞依次命名为SKOV3/GM-CSF-IL21、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL2l及SKOV3/Neo细胞。用RT-PCR检测GM-CSF与IL-21表达，MTT法检测细胞培养上清对小鼠脾细胞NK杀伤活性的影响。 结果：经酶切与测序鉴定pRSC-GM-CSF-IL21共表达质粒构建正确。SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21细胞中有相应目的基因GM-CSF、lL-21的表达。与SKOV3/Neo及SKOV3细胞相比，SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL2l、SKOV3/GM-CSF-IL2l细胞上清能够显著增强小鼠脾细胞NK杀伤活性。 结论：成功构建GM-CSF与lL-21基因共表达重组质粒pRSC-GM-CSF-1L21，并将其转染卵巢癌细胞，表达的GM-CSF与IL-21能显著增强小鼠脾细胞NK杀伤活性。 二． GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞在裸鼠体内抗瘤效应研究 目的：研究GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞系SKOV3后的体外影响及在裸鼠体内的抗肿瘤效应。 方法：体外分别培养SKOV3、SKOV3，Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21及SKOV3/GM-CSF-IL21细胞，用倒置相差显微镜、MTT比色法及流式细胞术(FCM)观察各细胞生长增殖特性；FCM测定细胞表面人类白细胞抗原ABC(HLA-ABC)、MHC I类相关分子(MIC A/B)与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达。将各细胞分别皮下接种BALB/c裸小鼠，监测各组荷瘤鼠肿瘤生长情况，观察GM-CSF与IL-21单独及联合诱导的抗肿瘤效应。检测荷瘤鼠外周血白细胞总数及中性粒细胞与单核细胞数，ELISA法检测血清IFN-γ和TNF-α含量，MTT比色法测定裸鼠脾细胞NK杀伤活性，RT-PCR检测各组裸鼠脾细胞中NKG2D分子的表达。 结果：SKOV3、SKoV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL21细胞的形态、增殖凋亡特性、细胞周期及HLA-ABC表达无明显变化；SKOV3/GM-CSF细胞能使ICAM-1表达升高；SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL21细胞使MIC A/B和ICAM-1表达显著升高。与SKOV3及SKOV3/Neo相比，SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和 SKOV3/GM-CSF-IL21组攻击的裸鼠体内肿瘤形成受到明显抑制，其中SKOV3/GM-CSF-1L21组更明显，与其它各组比较均有显著差异；sKOV3/GM-CSF-IL21攻击组裸鼠的外周血白细胞总数、中性粒细胞数、单核细胞数及1FN-γ和TNF-α含量均显著升高，脾细胞NK杀伤活性及NKG2D表达均增强。 结论：GM-CSF与IL-21基因共转染SKOV3细胞后，能使MIC A/B与ICAM-1分子表达上调，可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应，其抗肿瘤效果显著优丁单一GM-CSF或lL-21基因转染的SKOV3细胞。

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声明

前言

综述 卵巢癌肿瘤疫苗研究现状及进展

第一章GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第二章GM-CSF与IL-21基因共转染人卵巢癌细胞在裸鼠体内抗瘤效应研究

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

结论

参考文献

致谢

附录

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