金属硫蛋白对肝星状细胞增殖影响的相关性研究

摘要

目的：观察金属硫蛋白（Metallothionein1A/2A，MT1A/2A）对肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs）增殖的影响。 方法：①构建金属硫蛋白表达质粒pcDNA3．1-MT1A/pcDNA3．1-MT2A，重组质粒纯化后，酶切及测序鉴定。②通过转染试剂fuGENE-6将pcDNA3．1-MT1A/pcDNA3．1-MT2A转染到大鼠肝星状细胞（HSC-T6），细胞培养24-48小时后，加含400μg/ml G418的DMEM筛选2-3周。③分别用RT-PCR及免疫细胞化学方法检测MT1A/2A mRNA水平和蛋白水平的表达，以确定MT是否有过表达。④AgNOR染色法及MTT法检测HSCs增殖指数。流式细胞技术检测HSCs细胞周期的变化。 结果：①经酶切及测序鉴定，所克隆的基因片段与预期完全一致，序列无碱基突变，成功构建pcDNA3．1-MT1A/pcDNA3．1-MT2A真核表达质粒。②RT-PCR结果显示：转染pcDNA3．1-MT1A/pcDNA3．1-MT2A组的MT1A/2A mRNA表达水平明显上调，免疫细胞化学方法染色显示：转染目的基因组MT1A/2A染色胞浆呈棕黄色深染，而未转染组及pcDNA3．1组细胞浆呈淡染，表明MT能在转染的HSCs内过表达。⑨AgNOR染色法及MTT法结果显示：与转染pcDNA3．1组及未转染组相比，MT过表达的HSCs增殖明显加快，细胞增殖指数增高。用流式细胞术分析细胞周期，结果表明，MT过表达的HSCs在G0/G1期百分率降低，处在S+G2期的百分率增加，而且转染pcDNA3．1-MTIA组细胞凋亡减少（P<0．01）。 结论：实验结果显示，在体外，金属硫蛋白在活化的HSCs过表达可使促进其增殖，而且MT1A还有抑制其凋亡作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表(Abbreviations)

声明

前言

文献综述

第一章 材料与方法

第二章 实验结果

2.1 pDNA3.1-MT1A/pCDNA3.1-MT2A构建及转染结果：

2.2 HSC-T6细胞增殖检测

第三章 讨论

结论

参考文献

致谢

作者简介