促肝细胞生长素对肝衰竭患者血浆体外培养肝细胞的影响

摘要

目的：促肝细胞生长素（PHGF）用于临床治疗肝衰竭（HF）已有多年，但PHGF对HF的作用机制尚未十分明确。既往研究表明PHGF对成人肝细胞（HH）的增殖具有一定的作用，本实验拟通过复制HF细胞模型，研究PHGF对该模型的影响，并探讨药物作用的可能机制，为HF的临床治疗提供一定的理论依据。 方法：本实验采用肝衰竭患者血浆（LFP）添加到DMEM培养液中体外培养HH细胞，复制体外HF细胞模型。实验分为七组：胎牛血清（FBS）添加到DMEM培养液中体外培养HH细胞组（FBS组）；正常人血浆（NHP）添加到DMEM培养液中体外培养HH细胞组（NHP组）；HF细胞模型PHGF未干预组（LFP组）；HF细胞模型10μg/ml PHGF干预组、HF细胞模型20μg/ml PHGF干预组、HF细胞模型40μg/mlPHGF干预组、HF细胞模型80μg/ml PHGF干预组。采用倒置相差显微镜观察FBS组、NHP组、LFP组细胞形态，以及PHGF作用于HF模型后细胞形态的变化。采用台盼蓝（trypanblue）染色、细胞增殖计数法（CCK-8）检测不同实验组、不同时间点（24h、48h、72h）细胞生长增殖情况；应用流式细胞术（FCM）检测HH细胞凋亡和DNA合成的变化；通过活性荧光定量检测法检测细胞色素P4503A4（CYP4503A4）酶活性；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测CYP4503A4在mRNA水平表达量的改变。 结果：倒置显微镜下FBS组、NHP组中细胞形态正常；LFP组删细胞失去原有形态；40μg/ml PHGF干预LFP组后细胞形态接近正常，且数目较未干预LFP组明显增多。台盼蓝、CCK-8检测结果显示FBS组、NHP组中HH细胞生长良好，LFP组HH细胞呈抑制状态，PHGF体外干预后HH细胞的增生呈现时间和剂量依赖性。 FCM检测细胞凋亡率结果显示，FBS组为（1．87±0．18）％；NHP组为（2．68±0．39）％；LFP组为（30．13±3．95）％；40μg/mlPHGF组为（20．14±2．88）％。与FBS组、NHP组相比，LFP组凋亡率增高，差异有统计学意义；与LFP组相比，40μg/ml PHGF组HH细胞的凋亡率降低，差异有统计学意义。与FBS、NHP组相比，LFP组G0/G1期增加，S期、G2/M期分布减少，差异有统计学意义；与LFP组相比，40μg/mlPHGF组G0/G1期相对减少，S期、G2/M期分布增加，差异有统计学意义。 活性荧光定量检测酶活性结果显示，FBS组为0．481±0．048 nmol/（mg．min），NHP组为0．396±0．040 nmol/（mg．min），LFP组为0．196±0．020 nmol/（mg．min），40μg/mlPHGF组为0．264±0．025 nmol/（mg．min）；与FBS组、NHP组相比，LFP组CYP4503A4酶活性降低；与LFP组相比，40μg/mlPHGF组CYP4503A4 mRNA酶活性上升，差异有统计学意义。RT-PCR检测mRNA灰度比值，FBS组为1．001±0．072，NHP组为0．985±0．061，LFP组为0．503±0．038，40μg/mIPHGF组为0．726±0．048；与FBS组、NHP组相比，LFP组CYP4503A4 mRNA基因表达下降；与LFP组相比，40μg/mlPHGF组CYP4503A4 mRNA基因表达上调，差异有统计学意义。 结论：LFP体外培养HH细胞适合作HF的细胞模型；PHGF可能通过降低细胞凋亡，促进细胞增殖分裂，增强CYP4503A4解毒功能等促进HF细胞模型中细胞增生。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

综述一肝衰竭模型研究进展

综述二 细胞色素P450 3A4检测方法及与肝脏疾病研究进展

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

作者简介