自体内皮祖细胞移植防治经颈静脉门腔分流道再狭窄的实验研究

摘要

目的：探索家猪外周血来源的内皮祖细胞的分离、培养、鉴定的方法以及内皮祖细胞种植支架体外构建条件。
　　 材料及方法：用密度梯度离心法从普通幼年家猪外周血单个核细胞（monocytes，MNs），通过贴壁筛选得到内皮祖细胞（EPCs），从细胞形态、免疫组化及荧光染色等方面鉴定内皮祖细胞。采用冷沉淀法分离外周血中纤维蛋白原。将镍钛合金金属支架分别置入含有及不含有纤维蛋白原和凝血酶的培养液中（内皮祖细胞浓度为2.5×106/mL）共孵育。观察支架的形态，并将从支架表面沈脱下来的细胞进行计数，并继续培养鉴定。
　　 结果：普通幼年家猪外周血分离得到的单个核细胞MNs经体外培养呈内皮细胞样形态，光镜下从类圆形-多角形-梭形演变，表达内皮祖细胞的表面标志物CD31、CD34、VEGFR-2、vWF等，具有内吞乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）和结合荆豆凝集素（UEA-1）等内皮祖细胞的功能特性。镍钛合金支架在含纤维蛋白原的培养液中共孵育后呈管状，表面覆盖有一层生物膜。膜状物沈脱后细胞计数显示，加纤维蛋白原组细胞数量明显增多（5.0（士1.3）×105个vs4（士1.5）×103）。继续培养，这些细胞具有内皮祖细胞的功能特性。
　　 结论：普通幼年家猪外周血中存在具有增殖分化能力的内皮祖细胞（EPCs），可以通过密度梯度离心法分离得到，经体外培养，转化为内皮细胞。用纤维蛋白原作为黏附剂，可以将内皮祖细胞种植到金属支架丝表面，并保持内皮祖细胞的功能特性。
　　 目的：评价内皮祖细胞种植支架在经颈静脉肝内门体静脉分流术（TIPS）家猪动物模型中减少分流道再狭窄的疗效。
　　 材料及方法：15头家猪行TIPS介入手术，随机分为EPC种植支架组9例（实验组），裸支架组6例（对照组）。TIPS术后14天行直接门静脉造影，然后处死动物，作病理分析及免疫组化检查，记录分流道狭窄及阻塞情况，并用图像处理软件计算TIPS分流道假性内膜厚度及面积，结果行统计学分析。
　　 结果：15例TIPS手术均获成功。实验组分流道通畅5例，狭窄2例（狭窄率50％，70％），阻塞2例（共9例）。对照组狭窄1例（80％），阻塞5例（共6例）。两组通畅率有显著差异（56％vs0％，Fisher精确概率法p=0.03）。实验组假性内膜增生的厚度显著小于对照组。免疫组化显示实验组中通畅的分流道有完整的内皮形成。再狭窄分流道的假性内膜主要由胶原纤维组成，而通畅分流道的假性内膜主要由细胞成分组成。
　　 结论：内皮祖细胞种植支架植入促进了家猪模型TIPS分流道内皮化形成，可以提高分流道的通畅性。

目录

文摘

英文文摘

英文缩写词表

前言

参考文献

文献综述

综述一

参考文献

综述二

参考文献

第一部分

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分

材料与方法

结果

讨论

参考文献

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