慢病毒介导连环蛋白p120 shRNA对胰腺癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的：构建连环蛋白p120（p120 catenin，p120ctn）特异性shRNA重组慢病毒载体，感染胰腺癌PANC-1细胞，鉴定干扰效果，明确其对PANC-1细胞生物学行为的影响。
　　 方法：针对p120cm mRNA设计合成3对shRNA序列，连接入酶切线性化的慢病毒载体pGCSIL-GFP；PCR鉴定及测序正确后与构建成功的含p120ctn基因的载体pGC-FU-p120ctn-3FLAG共转染293T细胞，Western Blot筛选有效shRNA序列；包装慢病毒，测定病毒滴度；重组慢病毒感染胰腺癌PANC-1细胞，Real-time PCR及Western Blot鉴定干扰效果；免疫细胞化学检测p120ctn在PANC-1细胞中的定位情况；利用MTT法、粘附实验、Transwell小室法及流式细胞仪检测shRNA对PANC-1细胞增殖、粘附、侵袭及迁移能力和凋亡、细胞周期的影响。
　　 结果：PCR及测序证实成功构建出p120ctn shRNA慢病毒载体，病毒滴度达到3×109TU/mL；重组慢病毒感染PANC-1细胞后，Real-time PCR提示PANC-1细胞p120ctn mRNA表达下降82.60％，Western Blot提示p120ctn蛋白表达较干扰前显著下降：免疫细胞化学结果显示，在PANC-1细胞中，p120ctn主要在胞浆表达，尤以核周明显，胞膜无表达或极少表达；干扰后PANC-1细胞增殖力减弱，粘附、侵袭及迁移能力较正常对照组分别下降约61.69％、65.20％和45.19％；抑制p120ctn表达可促进PANC-1细胞凋亡，并诱导细胞周期发生再分布，G1期比例下降，S期比例上升。
　　 结论：成功构建连环蛋白p120ctn shRNA慢病毒载体，体外实验证实可显著下调胰腺癌PANC-1细胞p120ctn mRNA及蛋白的表达；下调PANC-1细胞胞浆内p120ctn表达可抑制胰腺癌PANC-1细胞的粘附、增殖、侵袭及迁移能力，促进PANC-1细胞凋亡并导致细胞周期再分布。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

前 言

文献综述

综述一 连环蛋白 p120 在常见肿瘤中的表达及意义

综述二 胰腺癌浸润及转移分子机制研究进展

第一部分 p120ctn sh RNA 慢病毒载体的构建及鉴定

第二部分 干扰后生物学功能检测

讨 论

结 论

致 谢

参考文献

作者简介