肾细胞癌中Sprouty2蛋白功能及其表达调控机制的研究

摘要

第一部分Sprouty2蛋白在肾细胞癌中的表达 目的：检测肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)组织中Sprouty 2蛋白的表达，研究其水平与肿瘤临床病理特征及临床转归的相关性。 方法：收集行肾根治性切除术并经病理证实为肾细胞癌的103例病例(92例为透明细胞癌，11例为乳头状细胞癌)，平均随访时间为51.2月，通过免疫组化及Western Blot肿瘤标本中Sprouty2蛋白的表达情况，结合相应的临床病理学资料进行统计学分析。 结果：与正常肾脏组织相比，RCC组织中Sprouty2蛋白的表达量明显下降，并且与肿瘤大小(P=0.002)、转移情况(P<0.001)、临床分期(P<0.001)、分级(P<0.001)及生存率(P=0.001)相关，单变量(P=0.001)及多变量(P=0.035)回归分析显示,Sprouty2蛋白的表达是RCC预后的独立参数指标。 结论：本研究的结果证实，Sprouty2的表达水平与肾细胞癌的进展相关，Sprouty2可作为一个独立的分子标记物在肾癌的临床诊断和治疗中发挥作用。 第二部分肾癌细胞中Sprouty2蛋白功能的研究 目的：研究Sprouty2蛋白对肾癌细胞增殖、侵袭等生物学功能的影响。 方法：采用RNAi技术，构建3组质粒，分别转染肾癌细胞系786-O，建Sprouty2低表达细胞株，通过MTT、Transwell等技术研究Sprouty2蛋白的表达水平对肾癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响。 结果：成功构建Sprouty2低表达肾癌细胞系，对其进一步研究发现，Sprouty2表达水平下调后，肾癌细胞的增殖、侵袭能力增强，与对照组及空质粒转染组比较差异有显著性(P<0.05)。 结论：Sprouty2的表达水平对肾癌细胞的功能有一定的影响，Sprouty2表达越低，肾癌细胞的增殖及侵袭力越强，进一步支持了第一部分研究关于其表达与预后关系的结果。 第三部分肾癌细胞中调控Sprouty2蛋白的机制 目的：探讨RcC细胞中调控sprouty2蛋白表达水平的可能机制。 方法：针对抑癌基因沉默的常见机制，分别采用DNA转甲基酶抑制剂5-aza-deoxycytidine(5-Aza-CdR)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin(TSA)处理细胞，MTT检测细胞增殖情况，WesternBlot检测sprouty2蛋白的表达变化，研究DNA甲基化修饰、组蛋白去乙酰化修饰等常见失活机制在Sprouty2基因沉默中的作用。采用生物信息学分析及染色质免疫共沉淀(CHIP)技术检测核转录因子-κB(NF-κB)参与Sprouty2基因转录水平调控的可能性，分别运用TNF-a以及SN50上调及下调NF-κB的活性，Westem Blot测Sprouty2蛋白的表达变化，MTT检测细胞增殖情况。 结果：通过5-Aza-CdR及TSA处理细胞，Sprouty2蛋白表达量没有明显增加。CHIP显示，NF-κB可以与Sprouty2基因启动子区特异性位点相结合，调控sprouty2蛋白的表达。通过激活或抑制NF-κB，可以使sprouty2的表达发生变化，进而引起肾癌细胞的生物学行为改变。 结论：肾细胞癌中，NF-κB的转录水平调节可能是Sprouty2蛋白低表达的重要机制。进一步的研究应从转录水平寻Sprouty2表达调控的机制。

目录

论文说明：论文主要缩略语英中文对照

声明

摘要

前言

第一部分Sprouty2蛋白在肾细胞癌中的表达及临床意义

1材料和方法

2结果

3分析与讨论

参考文献

第二部分肾癌细胞中Sprouty2蛋白功能的研究

1材料和方法

2结果

3分析与讨论

参考文献

第三部分肾癌细胞中调控Sprouty2蛋白的机制研究

1材料与方法

2结果

3分析与讨论

参考文献

小结

主要创新点

附录：英文论文 Down-Regulation of Sprouty 2 is Associated with Tumor Progression　and Survival in Patients with Renal Cell Carcinoma

致谢

综述　Sprouty2在肿瘤发生及发展过程中的研究进展