冬虫夏草菌粉对5/6肾大部切除大鼠肾脏功能保护作用及其机制探讨

摘要

目的：慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）是严重危害人类健康的常见病，是导致终末期肾衰形成的关键原因，如何防治CKD进展已成为临床重大课题。冬虫夏草(Cordyceps sinensis，CS)是我国传统名贵中药，含有甘露醇、核苷、麦角固醇、多糖、微量元素等多种有效成分，应用于肾脏疾病的治疗已有上千年的历史，但其确切作用机制仍不甚清楚。近年来研究表明，氧化应激参与了肾脏病的发生、发展过程，是影响CKD预后的重要危险因素。本研究利用大鼠5/6肾大部切除模型，观察冬虫夏草菌粉对肾脏的保护作用，并着重探讨其对氧化应激及线粒体功能的影响，及其可能的肾脏保护作用机制。
　　方法：SPF级8周龄SD雄性大鼠34只，体重200-220g。适应性喂养1周，随机分为假手术（SHAM）组，n=10;5/6肾大部切除(SNX)组，n=12;5/6肾大部切除+虫草干预(CS)组，n=12。建模次日起CS组予人工虫草菌粉生理盐水溶液2g/kg·bw·d灌胃，余两组予等体积生理盐水。分别于建模术前、术后2周、4周、8周、10周、12周监测大鼠体重、血压变化，并收集24小时尿液检测24h尿总蛋白、NAG。12周时心脏取血检测血清肌酐(SCr)、尿素氮（BUN），留取肾脏组织分别行一般病理检查观察病变情况，电镜观察肾小管上皮细胞线粒体数量及形态改变;新鲜肾组织匀浆后检测氧化应激相关指标(GSH-Px、SOD、MDA)，提取线粒体检测膜电位及ROS改变;Western Blot检测线粒体内Cyto-C、Prohibitin及胞浆Cyto-C、Prohibitin、Caspase-3、Caspase-9表达程度。检测虫草对肾脏组织炎症因子如IL-1β、IL-6、MCP-1以及TNF-α表达的影响。
　　结果：①12周时，与SHAM组相比，SNX组与CS组大鼠体重显著降低(P＜0.01)，血压显著升高(P＜0.01)，但CS组较SNX组体重显著升高(P＜0.01)，血压值显著下降(P＜0.01)。②CS组24h尿蛋白定量、NAG水平分别于第6周、第4周开始与SNX组相比显著降低(P＜0.05)。SNX组与CS组两者第12周SCr及BUN水平较SHAM组显著升高(P＜0.01)，但两组比较，CS组较SNX组显著下降。③通过PAS、MASSON染色观察肾脏病理学改变发现，与SHAM组比较，SNX组与CS组出现不同程度的肾小球硬化、小管间质纤维组织增生及炎症细胞浸润。与SNX组相比，CS组小球硬化指数、小管间质纤维化程度及炎症细胞浸润程度明显下降(P＜0.01)。④电镜结果显示:与SHAM组比，SNX及CS组小管上皮细胞中线粒体数量减少，形态发生改变，CS组较SNX组有所改善(P＜0.01)。⑤与SHAM组比，SNX组Mn-SOD、GSH-Px、JC-1水平明显降低(P＜0.01)，CS组较SNX组以上指标均显著升高(P＜0.01)，MDA、ROS则呈现相反趋势(P＜0.01)。⑥Western Blot结果示:SNX组线粒体Cyto-C、Prohibitin表达水平与SHAM组显著降低(P＜0.05)，而胞浆中两者表达显著升高，CS组能够有效改善这一表达倒置现象(P＜0.01)。同时胞浆中Caspase-3、Caspase-9表达情况SNX组及CS组均较SHAM组显著升高(P＜0.01)，CS组较SNX组显著降低(P＜0.01)。同时CS干预可降低促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1以及TNF-α的表达(P＜0.01)。
　　结论：人工虫草菌粉能够显著改善的肾脏功能，同时对肾脏组织细胞线粒体形态功能具有显著保护作用。提示虫草对肾脏的保护机制可能与其提高机体抗氧化能力，改善氧化应激水平及调节组织细胞的凋亡有关。

目录

声明

摘要

缩略词

前言

文献综述 慢性肾脏病进展机制及冬虫夏草在慢性肾脏病中的应用

1 慢性肾脏病的概念

2 肾脏纤维化相关机制

3 冬虫夏草在CKD中的应用

材料与方法

1 材料

2 方法

3 SDS-PAGE电泳

4 蛋白质转膜

5 膜的封闭和抗体的孵育

6 检测结果(曝光)

研究内容

1 一般情况观察

2 肾脏组织病理学改变

3 人工虫草菌粉对线粒体形态功能及氧化应激的影响

4 人工虫草菌粉对凋亡途径的影响

研究结果

1 一般情况改变

2 虫草菌粉对肾脏纤维化及炎症细胞浸润程度的影响

3 冬虫夏草菌粉对线粒体形态功能及氧化应激的影响

4 冬虫夏草菌粉对凋亡途径因子的影响

5 虫草菌粉对炎症相关指标的影响

讨论

1 CRF大鼠模型的评价

2 冬虫夏草菌粉对5／6肾大部切除大鼠的肾脏保护作用

3 冬虫夏草菌粉延缓CRF进展的机制探讨

4 小结

结论

致谢

个人简介

参考文献