表没食子儿茶素没食子酸酯对UVB诱导人原代表皮黑素细胞光损伤干预作用的研究

摘要

背景： 日光中的紫外线(UV)，主要为长波紫外线(UVA)和中波紫外线(UVB)，是导致皮肤日晒伤、光老化及皮肤癌的重要因素。UVA能穿透皮肤到达真皮深层，引起免疫抑制，并能介导自由基对DNA的损伤。UVB照射可导致细胞DNA损伤及突变频率增加，自由基及活性氧的形成，局部及系统免疫抑制。在相同剂量下，UVB的光损伤作用比UVA约大800～1000倍。以往认为黑素瘤的形成主要与UVA相关，但近年来越来越多的流行病学数据和动物实验提示UVB照射与黑素瘤的发生发展密切相关。UVB照射引起的细胞DNA损伤表现为DNA光产物在嘧啶位点的形成，其中75％以上为环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)，剩下部分为6-4光产物((6-4)PPs)及其同源异构体。DNA光产物的清除主要通过核苷酸切除修复(NER)途径，当损伤细胞未能得到完全修复时，残余光产物能引发免疫抑制，最终致肿瘤形成。绿茶提取物茶多酚的主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate，EGCG)有着广泛的生物学效应，如抗氧化、清除氧自由基、预防肿瘤的发生和抑制肿瘤细胞增殖等作用。有实验报道EGCG对UVB诱导细胞内光产物的清除有明显促进作用，从而可抑制肿瘤的发生。本实验组已经就EGCG和UVB干预对HaCaT细胞、人原代成纤维细胞光产物的影响进行了一系列研究，但尚无黑素细胞方面的研究和探讨。 目的： 观察黑素细胞合成培养基培养下人原代表皮黑素细胞的生长情况。观察UVB诱导人原代表皮黑素细胞光产物形成和清除情况及EGCG对此过程的干预作用，从而对黑素细胞光产物变化情况和EGCG光保护效应进行初探。 材料与方法： 1.人原代表皮黑素细胞的分离和培养：黑素细胞合成培养基培养人原代黑素细胞，观察其生长情况。定量接种于培养皿或96孔板中进行下步实验； 2.紫外线照射和EGCG干预处理：根据实验设计定时定量照射培养细胞，并预先或在UVB照射后加入药物进行干预处理； 3.细胞损伤的形态学观察：光学显微镜观察紫外线照射对细胞形态学的影响； 4.药物浓度筛选：MTT法检测细胞增殖活性，以定量无细胞毒性的实验用药物浓度； 5.光损伤产物形成及清除检测：采用免疫荧光法和免疫细胞化学法定性检测，免疫斑点印迹法定量分析胸腺嘧啶二聚体(CPDs)的形成和清除情况； 6.流式细胞术检测UVB、EGCG处理对MC凋亡和细胞周期捕获的影响。 结论： 黑素细胞合成培养基培养人原代黑素细胞生长良好，可替代传统的黑素细胞培养基进行实验研究。EGCG对UVB诱导CPDs的形成无明显干预作用，但能加速CPDs的清除。

目录

论文说明：中英文对照及缩略语

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全文技术流程图

摘要

前言

第一节黑素细胞合成培养基培养人原代表皮黑素细胞

第二节UVB照射和EGCG处理对人原代黑素细胞生长的影响

第三节EGCG对UVB照射后人黑素细胞光产物产生和清除的影响

第四节EGCG促进UVB照射后人黑素细胞光产物清除相关机制的研究

附正文彩图

全文小结

参考文献

致谢

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