白藜芦醇对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化以及TNF-α诱导的脂肪因子表达的影响

摘要

目的：(1)观察白藜芦醇对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响；(2)探讨白藜芦醇对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的脂肪因子表达的影响及其机制。 方法：(1)通过CCK-8法检测Sirtl激动剂-白藜芦醇对3T3-L1细胞增殖活力影响，油红O染色法、甘油三酯GPO-POD酶法测定白藜芦醇对3T3-L1细胞脂肪含量增长的影响情况，借助于甘油含量测定试剂盒检测3T3-L1脂肪细胞脂质分解的情况；(2)分别以不同浓度白藜芦醇、核因子-κB(NF-κB)的抑制剂-BAYll-7082或Sirtl抑制剂-Sirtinol和TNF-α共同处理成熟3T3-L1脂肪细胞，用定量PCR技术、ELISA技术检测各条件下白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及脂联素基因转录、蛋白分泌情况；(3)分别以不同浓度白藜芦醇或Sirtinol和TNF-α共同处理转染含IL-6、MCP-1启动子的荧光素酶报告质粒的HEK293细胞，通过荧光素酶基因报告技术检测各组的荧光素酶活性；(4)TNF-α(10ng/ml)处理表达质粒(pcDNA-Sirtl或pCMV-IκBa)与荧光素酶报告质粒共转染的HEK293细胞，通过荧光素酶报告技术检测各组的荧光素酶活性；(5)以不同浓度白藜芦醇和TNF-α共同处理成熟3T3-L1脂肪细胞1h，通过凝胶电泳迁移率检测(EMSA)技术检测各组细胞核NF-κB的DNA结合能力；(6)TNF-α(10ng/ml)处理分别转染pcDNA-Sirt1或pcDNA3.1/myc-His B的HEK293细胞，通过EMSA技术检测各组NF-κB的DNA结合能力。 结果：(1)白藜芦醇(0～100μM)以剂量、时间依赖方式抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长，当浓度>50μM时，白藜芦醇引起分化中期及分化成熟的3T3-L1脂肪细胞的活力下降；此外，白藜芦醇以剂量依赖方式阻止细胞分化过程中细胞内的脂肪含量聚积，但对脂肪分解无明显影响；(2)白藜芦醇以剂量依赖的方式减弱TNF-αc对3T3-L1脂肪细胞IL-6、MCP-1以及脂联素的基因转录、蛋白分泌的影响；BAY11-7082阻止、而Sirtinol增强TNF-α对IL-6、MCP-1基因转录的上调作用；(3)白藜芦醇减弱、而Sirtinol增强TNF-α诱导的IL-6、MCP-1启动子活性；(4)过表达NF-κB抑制蛋白α(IκBα)可以抑制TNF-α诱导的IL-6、MCP-1启动子的转录活性；(5)过表达Sirt1可以抑制TNF-α诱导的NF-κB依赖的转录活性，但不影响NF-KB的DNA结合能力；(6)白藜芦醇以剂量依赖方式下调NF-κB的DNA结合能力以及NF-κB依赖的转录活性。 结论：(1)白藜芦醇能够以剂量依赖的方式抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化；(2)白藜芦醇通过直接以及激活Sirt1蛋白的功能的方式间接下调TNF-α诱导的NF-κB的转录活性，从而抑制TNF-α对IL-6、MCP-1基因表达的上调效应。

目录

论文说明：英文缩写及注释

声明

前言

第一部分白藜芦醇抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分白藜芦醇阻止TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞的脂肪细胞因子表达及其机制

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

总结

致谢

附录在读期间撰写与发表的论文及综述

发表论文一

发表论文二

发表论文三

发表论文四

发表论文五

发表论文六