雷公藤红素通过调控趋化因子CCL4的表达抑制破骨细胞分化与迁移的研究

摘要

实验目的: 本实验探讨在破骨细胞分化过程中趋化因子家族表达变化和雷公藤红素对趋化因子CCL4表达及破骨细胞分化、招募迁移的影响。 实验方法: 1.趋化因子家族在骨髓源性破骨细胞分化过程中的表达 采用M-CSF和RANKL诱导大鼠骨髓源性破骨细胞，通过TRAP染色及破骨细胞标志性基因（Trap、Ctsk、CTR）的方法检测鉴定破骨细胞。分别于破骨细胞分化第3、5、7天收集细胞，提取mRNA，用基因芯片的方法检测趋化因子家族的表达，并根据基因芯片结果利用实时定量PCR的方法进行验证。 2.CCL4在骨髓源性破骨细胞中的表达及对破骨细胞迁移的影响 采用PCR的方法检测大鼠骨髓源性破骨细胞分化过程中CCL4的表达，并利用Transwell小室，以不同浓度CCL4中和抗体干预RAW264.7细胞，观察CCL4对破骨细胞前体和破骨细胞迁移的影响。 3.雷公藤红素对CCL4的表达和破骨细胞分化迁移的影响 用CCK-8的方法检测雷公藤红素对骨髓细胞增殖的影响。以不同浓度的雷公藤红素干预大鼠骨髓源性破骨细胞，用PCR的方法检测CCL4的表达，TRAP染色观察破骨细胞分化情况。采用Transwell小室，观察不同浓度的雷公藤红素对RAW264.7细胞迁移的影响。 实验结果: 1.趋化因子家族在骨髓源性破骨细胞分化过程中的表达 基因芯片结果发现多个趋化因子在破骨细胞分化过程中明显升高，其中以CCL7、CCL4、CCL12表达升高极为明显，并同时采用实时定量PCR的方法进行验证，其结果与芯片表达相一致。 2.CCL4在骨髓源性破骨细胞中的表达及对破骨细胞迁移的影响 趋化因子CCL4在破骨细胞分化第三天表达明显升高，以CCL4中和抗体干预细胞阻断CCL4表达后，发现迁移的RAW264.7细胞和破骨细胞数目均明显减少。 3.雷公藤红素对破骨细胞前体迁移的影响 用不同浓度的雷公藤红素干预骨髓源性破骨细胞，Cel呈剂量依赖性抑制破骨细胞的分化和趋化因子CCL4的表达，并且与对照组相比，雷公藤红素明显抑制RAW264.7细胞的迁移。 实验结论: 1.CCL7、CCL4、CCL12等多个趋化因子家族基因在破骨细胞分化过程中高表达，其中CCL4能影响破骨细胞的招募和迁移。 2.Cel抑制趋化因子CCL4的表达，可能是其抑制破骨细胞分化和破骨细胞前体迁移的机制之一。

目录

声明

英文缩略词

摘要

前言

第一部分 骨髓源性破骨细胞分化过程中趋化因子变化的研究

引言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 CCL4在破骨细胞分化过程中的表达及对破骨细胞前体招募和迁移的影响

引言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

第三部分 雷公藤红素对破骨细胞分化及破骨细胞前体迁移的影响

引言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述 类风湿关节炎骨侵蚀研究进展

致谢