OA10是一种新的p38α蛋白激酶抑制剂能够抑制破骨细胞的分化和骨吸收作用

摘要

研究目的: 为了研究潜在的治疗骨质疏松抗破骨细胞骨吸收的药物，我们合成了一种新的化合物Tert-butyl4-(3-(1H-indole-2-carboxamido) benzoyl) piperazin-e-1-carboxylate(OA10)，并发现OA10在一定剂量时能够抑制RANKL（破骨细胞分化因子）诱导的破骨细胞的形成及其骨吸收功能。OA10的这种生物活性被进一步证明通过它能抑制破骨细胞特异性基因的表达，包括TRAP（抗酒石酸酸性磷酸酶）、CTSK（组织蛋白K受体）、CTR（降钙素受体）。更进一步的分子机制研究表明OA10通过抑制p38α的磷酸化来抑制c-Fos和NFATc1（激活T细胞的核因子1）的表达，而并不影响NF-κB（核因子-kappa B）或JNK（c-Jun氨基端激酶）通路，总的来说，OA10通过抑制p38-c-Fos-NFATc1通路抑制破骨细胞的形成，因此OA10是一种治疗破骨细胞相关的溶骨性疾病的潜在药物。 研究方法: 1.药物合成基于Scio469（一种研究比较透彻的p38α抑制剂）;使用CCK-8法检测筛选出的药物OA10对骨髓单核/巨噬细胞的毒性;用小牛骨片骨吸收实验检测OA10对破骨细胞骨吸收功能的影响; 2.用TRAP染色法检测不同浓度的OA10对破骨细胞分化成熟的影响;用Real-time PCR技术检测OA10对破骨细胞特异性基因的表达的作用情况;用Western Blot法检测OA10对RANKL激活的P-P38、P38、JNK、P-JNK、IkBα、c-Fos和NFATc1信号通路的影响。 研究结果: 1.OA10在0.3125μM时即可明显的抑制破骨细胞的形成，而在3.614μM时才表现出药物毒性。 2.OA10可抑制破骨细胞的分化成熟以及骨吸收功能(≥0.3125μM)，同时抑制破骨细胞特异性基因(TRAP、CTSK、CTR)的表达，可抑制RANKL激活的P38介导的c-Fos-NFATc1信号通路的激活。

目录

声明

摘要

缩略语说明

前言

材料

1．1．1 主要试剂和仪器设备

1．1．2 动物来源

1．1．3 主要试剂的配制

1．2 骨髓单核／巨噬细胞的提取及培养

1．3 方法

1．3．1 CCK-8细胞毒性实验

1．3．2 体外破骨细胞分化实验

1．3．3 破骨细胞鉴定——TRAP染色

1．3．4 骨吸收实验

1．3．5 扫描电子显微镜观察

1．3．6 Realtime-PCR法检测破骨细胞标志性基因的表达

1．3．7 Western Blot分析

1．3．8 统计学分析

2．1 结果

2．1．1 OA10可以抑制破骨细胞的分化

2．1．2 OA10可剂量依赖性的抑制破骨细胞的骨吸收功能

2．1．3 OA10可以抑制破骨细胞标志性基因的表达

2．1．4 OA10可抑制RANKL激活的p38信号通路

3．1 讨论

4．1 全文总结

参考文献

文献综述 破骨细胞的分化与形成的研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢