高效液相色谱串联质谱法同时检测头发中内源性大麻素和糖皮质激素

摘要

内源性大麻素和糖皮质激素系统是人体中有序、必不可少的中枢调节结构，影响着许多生理过程，例如镇痛、降低体温、止痛、能量和食欲调节以及葡萄糖和脂类化合物的新陈代谢。目前主要研究的内源性大麻素是花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)，主要研究的糖皮质激素是皮质醇和可的松。头发基质可回溯性地记录生理功能产生时糖皮质激素和内源性大麻素之间的关联。但是，2-AG自发转化为同分异构体1-AG和OAEA自发重排成AEA，这是在头发中准确检测2-AG和AEA的重大障碍。本文旨在建立一种同时检测头发中2-AG、AEA、皮质醇和可的松含量的方法。此外，招募473名被试，探讨头发中2-AG、AEA的浓度与性别、身体健康指数以及糖皮质激素的关联。
　　本文基于高效液相色谱串联质谱仪Q-Trap3200，在大气压化学离子源(APCI)正离子模式下，采用多反应检测(MRM)模式进行检测。实验采用甲醇作为孵育溶液，并利用甲醇和去离子水的酸性混合溶液作为流动相以避免OAEA的重排和2-AG转化为1-AG。实验利用配有5μm，150mm X4.6mm C18柱的安捷伦1200液相色谱系统进行物质的层析分离。流动相为甲醇和水(90∶10)的混合物，其中含有2mM的乙酸铵。流速为500μL/min。
　　该方法AEA的检测限为1.5pg/mg，2-AG为6pg/mg，可的松和皮质醇均为0.5pg/mg。AEA的线性范围在2.5-250pg/mg之间，2-AG的线性范围在15-1250pg/mg之间，皮质醇和可的松的线性范围均在1-250pg/mg之间。所有待测物的日内、日间精密度都小于20％，回收率大于90％。人群分析显示，2-AG和AEA显著正相关，2-AG和皮质醇、可的松显著正相关;AEA和皮质醇显著正相关，但与可的松不相关。肥胖人群的2-AG和皮质醇含量高于正常人群。男性体内2-AG和皮质醇含量显著高于女性，但AEA含量却显著低于女性。
　　本文建立了一种检测头发中内源性大麻素和糖皮质激素的新方法。该方法操作简单、可快速辨别，而且灵敏性高，能准确地检测头发中的2-AG、AEA和皮质醇、可的松含量。尽管这种方法只检测了这四种物质，但仍可用于同时检测其他分析物。

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摘要

Abstract

ACRONYMS

TABLE OF CONTENTS

CHAPTER 1 INTRODUCTION

1．1 Background

1．1．1 A general overview of the functionalities of glucocorticoid and endocannabinoid systems as well as the implication of their relationship physiologically

1．1．2 Obesity，endocannabinoids and glucocorticoids：A synopsis in brief

1．1．3 The HPLC-MS／MS analysis technique

1．2 Statement of the problem

1．3 Significance of the study

1．4 Research objectives

1．4．1 General objective

1．4．2 Specific objectives

CHAPTER 2 REVIEW OF RELATED LITERATURE

2．1 An outline of some prior methods used for quantification of glucocorticoids and endocannabinoids in various matrices

2．2 Matrix effect in LC-MS／MS based methods and the importance of solid phase extraction(SPE)application

2．3 The peculiar chemistry and stability of 2-AG and AEA

2．4 Stress，obesity，endocannabinoids and glucocorticoids：A look at their relationship and its clinical implications

2．5 Merits and demerits associated with quantification of analytes in hair

CHAPTER 3 RESEARCH METHODOLGY

3．1 Reagents and solution preparation

3．2 Research Participants

3．3 Hair sample collection

3．4 Sample treatment

3．5．HPLC-MS／MS conditions

3．6 Method validation

3．7 Statistical Analysis

CHAPTER 4 RESEARCH RESULTS

4．1 Chromatography

4．2 Validation parameters

4．3 Intercorrelations between AEA，2-AG，cortisol and cortisone

4．4 The influence of gender and BMI on analyte concentrations

CHAPTER 5 DISCUSSION OF RESEARCH FINDINGS

CHAPTER 6 LIMITATIONS OF THE STUDY，RECOMMENDATIONS FOR FUTURE RESEARCH AND CONCLUSION

ACKNOWLEDGMENTS

REFERENCES