EZH2在ER阳性乳腺癌细胞增殖中的作用及白藜芦醇的干预效果研究

摘要

ER阳性乳腺癌的增殖依赖于雌激素及雌激素受体（ER），雌激素通过与ER的结合进而激活ER及其下游靶基因，促进肿瘤的生长。EZH2在多种肿瘤中高表达，其中包括乳腺癌，在肿瘤的发生发展进程中扮演着重要角色。E ZH2是多梳抑制复合物2（PRC2）的酶活性核心亚基，可以催化组蛋白H3K27的甲基化进而发挥基因沉默的功能。另外EZH2也可以不依赖于H3K27me3直接发挥作用。研究表明在ER阳性乳腺癌细胞中，EZH2可以连接ER与W nt信号，共同促进细胞。但是E ZH2对E R信号的调控尚不明确。白藜芦醇广泛存在于自然界中的各种食物中，如葡萄、花生、草莓和大豆等。大量的体内和体外研究表明白藜芦醇对ER阳性乳腺癌具有明显的抗肿瘤作用。研究报道许多植物化学物可以通过对EZH2的抑制发挥各种抗癌功能，因此，明确EZH2对ER信号的调控以及EZH2在白藜芦醇抗ER阳性乳腺癌中的作用可以为ER阳性乳腺癌的治疗提供进一步的思路和策略。 目的：本研究采用ER阳性乳腺癌细胞MCF-7和T47D作为研究对象，探讨EZH2在E R阳性乳腺癌增殖中的作用以及白藜芦醇的干预效果，从而为EZH2作为ER阳性乳腺癌细胞的治疗靶点提供新的参考依据，为白藜芦醇作为ER阳性乳腺癌的治疗药物应用于临床提供一个新的理论参考。 方法：采用CCK-8实验、细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖；采用实时定量PCR检测目的基因的mRN A水平；采用蛋白质免疫印记实验检测目的基因的蛋白水平；采用细胞瞬时转染实验敲除EZH2。 结果：（1）EZH2在ER阳性乳腺癌增殖中的作用：CCK-8实验结果显示E2可以促进ER阳性乳腺癌细胞MCF-7和T47D的增殖，且这种作用可以被ER拮抗剂ICI阻断，说明ER阳性乳腺癌细胞的增殖依赖于ER。在E2（0-10nM）的刺激下，细胞中EZH2的mRNA和蛋白的表达水平均升高，敲除EZH2使细胞增殖减缓，能够逆转E2对细胞增殖的促进作用；另外，抑制EZH2的表达也能抑制ER蛋白及其靶基因pS2mRNA的表达。ER拮抗剂ICI也能阻断E2对EZH2mRNA及蛋白的促进作用。E2能够激活细胞中ERK1/2的磷酸化，ERK1/2信号抑制剂U0126能够阻断E2对细胞增殖的促进作用，同时也能逆转E2对EZH2表达的促进作用。 （2）EZH2在REV抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖中的作用：用白藜芦醇（0-80μM）处理ER阳性乳腺癌细胞时，CCK-8实验显示细胞增殖被抑制，实时定量PCR和蛋白质免疫印记实验结果表明白藜芦醇可以降低细胞中EZH2的mRNA和蛋白的表达水平，用siRNA敲除EZH2或者EZH2的抑制剂DZNep均能削弱白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用。蛋白质免疫印记实验结果显示白藜芦醇可以降低细胞中p-ERK1/2蛋白的表达水平，ERK1/2信号抑制剂U0126能够削弱白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用，同时也能削弱白藜芦醇对EZH2蛋白表达的抑制。另外白藜芦醇也能降低细胞中STAT3的磷酸化及AKT的磷酸化水平，但是STAT3磷酸化的抑制剂stattic及AKT磷酸化的抑制剂LY294002不影响细胞中EZH2的表达。 结论：在ER阳性乳腺癌细胞中，E2可以通过激活ERK1/2的磷酸化促进EZH2表达的增强进而激活ER信号，最终促进细胞增殖，而白藜芦醇可以抑制通过抑制ERK1/2的磷酸化抑制EZH2进而抑制细胞增殖。

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