胰岛素对胆管癌QBC939细胞生长转移及耐药性影响研究

摘要

目的：本研究旨在探讨胰岛素对胆管癌细胞生长转移及对化疗药物吉西他滨敏感性的影响及其分子机制。 方法：(1)采用0，0.01，0.1，1μM浓度梯度的胰岛素作用于对数生长期的胆管癌QBC939细胞24h后，光学显微镜观察细胞形态及数目变化，并用MTT技术进一步检测细胞活性变化，以探讨胰岛素对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响；(2)采用上述浓度的胰岛素作用胆管癌QBC939细胞24h后，流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化情况，以了解胰岛素对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响；(3)采用上述浓度的胰岛素作用胆管癌QBC939细胞24h后，划痕试验检测肿瘤细胞迁移差异，以探讨胰岛素对人胆管癌QBC939细胞转移的影响；(4)为进一步检测胰岛素作用分子机制，采用上述浓度的胰岛素作用胆管癌QBC939细胞24h后，Western Blot检测可调控肿瘤细胞活性和增殖的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）在肿瘤细胞中表达差异；(5)为检测胰岛素对胆管癌化疗药物吉西他滨敏感性影响，首先运用MTT技术检测吉西他滨对胆管癌QBC939细胞活性的影响，并计算其半抑制浓度(IC50)；吉西他滨和胰岛素共同作用胆管癌QBC939细胞24h后，光学显微镜及MTT检测细胞数目变化及活性的差异；(6)为进一步检测胰岛素对胆管癌QBC939细胞耐药影响的机制，吉西他滨和胰岛素共同作用胆管癌QBC939细胞24h后，Western Blot检测P-糖蛋白的表达差异。 结果：(1)光学显微镜下可见随着胰岛素浓度的增加，胆管癌QBC939细胞数目及密度增加；MTT检测结果亦提示胰岛素可提高肿瘤细胞活性；(2)流式细胞术检测胰岛素对胆管癌QBC939细胞凋亡影响，结果提示其对肿瘤细胞凋亡影响无统计学差异；(3)划痕试验结果表明胰岛素可促进胆管癌QBC939细胞的迁移；(4)Western Blot检测提示随着胰岛素浓度的增加，PI3K在胆管癌QBC939细胞中表达水平上调；(5)MTT检测提示吉西他滨明显抑制胆管癌QBC939细胞活性，其半抑制率(IC50)为48.5ug/ml，在吉西他滨和不同浓度的胰岛素共同作用胆管癌QBC9393细胞24h后，光学显微镜及MTT提示较对照组，胰岛素组随着药物浓度的增加，细胞数目及活性升高；(6)吉西他滨和胰岛素共同作用胆管癌QBC939细胞24h后，Western Blot检测和耐药性密切相关的P-糖蛋白表达水平，结果提示和空白组相比，加药组P-糖蛋白的表达水平随着胰岛素浓度的增加而升高。 结论：(1)胰岛素可促进胆管癌QBC939细胞增殖及侵袭，而对细胞凋亡无明显影响；(2)胰岛素促进胆管癌QBC939细胞生长转移可能与PI3K的表达上调相关；(3)胰岛素可降低胆管癌QBC939细胞对吉西他滨的敏感性，且其机制可能与P-糖蛋白的表达增加有关。

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