苹果梨杂交后代单株的RAPD分析

摘要

本研究以红金秋、延光梨等6个梨属及红金秋×苹果梨(论文中将供试用的红金秋×苹果梨杂交单株21株简称为1号～21号)的F<,1>代杂种群体21株为试材，应用RAPD技术，对其进行了品种鉴定和分类地位的研究。结果表明： 采用改良CTAB法在提取部分梨基因组DNA过程中表现最好且纯度最高：SDS-CTAB法存在大量的降解片段，DNA的获得率不高；经显著性方差分析，采用改良SDS法提取的各梨品种DNA产率均显著优于其他方法，但纯度较低：高盐低pH值法产率和纯度均最低且完整性均不理想。本实验最终采用CTAB改良法快速提取到了较高质量苹果梨杂交后代基因组总DNA用于RAPD扩增，并在RAPD反应中筛选出17个10碱基随机引物，它们的多态性百分率大多在76.07％以上。确定了RAPD-PCR苹果梨杂交后代最适反应体系为：总反应体系为25ul，其中模板DNA浓度为135ng/μl，引物浓度为15pmol，dNTP浓度为1.5mmol/L，Mg<'2+>浓度为1.5mmol/L及Taq DNA聚合酶浓度为1.0 u，其余用重蒸馏水补充。扩增程序为：预变性94℃5min，变性94℃1min，退火温度40℃1min，延伸72℃1.5min，共40个循环：72℃最终延伸5min。 建立了27个样品的指纹图谱。找到了4个样品的特征标记。27个样品中的20个样品可以用一个引物的两条带和其它样品区分开。 对供试苹果梨杂交后代及其相关品种27株进行了RAPD扩增，根据遗传距离进行了聚类分析，以遗传距离0.30为结合线，将供试样品分成了5类。27个样品的遗传距离范围在0.10～0.46之间，以遗传距离0.30为结合线，将供试样品分成了5类：第一类全部是苹果梨杂交后代，包括：红×苹2号、3号、5～21号，共19个单株；第二类包括红金秋、红×苹1号、4号、苹果梨，说明红×苹l号和4号与苹果梨亲缘关系最近，继承苹果梨的基因较多，其他杂交后代继承红金秋的基因较多；红金秋是大香水和苹果梨的杂交后代，从图11中看出红金秋与苹果梨关系较近，说明红金秋本身遗传了更多的苹果梨的基因；第三类是大香水；第四类是小香水；第五类包括延光梨和东宁5号梨。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录

声明

前言

1材料与方法

1.1试验材料

1.2试验方法

1.2.1基因组总DNA提取

1.2.2基因组DNA检测

1.2.3DNA浓度测定及定量稀释

1.2.4 RAPD分析

1.2.5引物筛选

1.2.6数据处理及分析

2结果与分析

2.1苹果梨杂交后代及相关品种叶片的形态学观察比较

2.2不同提取方法对梨品种基因组DNA提取效果的影响

2.2.1不同提取方法对梨品种基因组DNA提取中表现差异的比较

2.2.2基因组DNA检测

2.3苹果梨杂交后代RAPD反应体系优化

2.3.1模板DNA浓度对RAPD扩增效果的影响

2.3.2引物浓度对RAPD扩增效果的影响

2.3.3 dNTP浓度对RAPD扩增效果的影响

2.3.4 Tag DNA聚合酶浓度对RAPD扩增的影响

2.3.5 MgCl2浓度对RAPD扩增的影响

2.3.6扩增反应程序退火温度对RAPD扩增影响的比较

2.4引物的筛选

2.5扩增结果的RAPD谱分析

2.6苹果梨杂交后代及其相关品种的鉴别与特征标记的选拔

2.7 27个苹果梨杂交后代及相关品种UPGMA聚类分析

3.讨论

3.1DNA的提取

3.2 RAPD反应条件的建立及应注意的问题

3.3 RAPD在苹果梨杂交后代及相关品种鉴定中的应用

4.结论

致谢

参考文献