春剑和大花蕙兰种间杂交种子无菌萌发及杂交后代的RAPD分析

摘要

本研究以春剑‘翠仙’(Cymbidium longibracteatum‘cuixian’)、大花蕙兰‘黄金虎’(C.. Moring Moon‘Great Tiger’)、‘溪流’(C.hybridium Enzan Stream‘Orpheus’)为材料进行种间杂交，对杂交种子进行非共生萌发试验，并运用RAPD分子标记对杂交F1代进行分析。本研究的目的是通过兰属种间杂交方法培育出新的种质，并在分子水平上评价杂交后代特性，为春剑与大花蕙兰的杂交育种进行基础性的探索工作。主要研究结果如下。
　　 1.以春剑为母本，大花蕙兰为父本均能获得杂交果实，其中春剑‘翠仙’×大花蕙兰‘溪流’结果率最高，为78.5％；以大花蕙兰为母本，春剑‘翠仙’为父本，杂交结果率均为0；春剑为试材进行自交易于成功，结果率为100％。
　　 2.杂交种子无菌萌发的最适培养基为：MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+Tryptone50mg/L+AC1000mg/L;原球茎增殖的最佳培养基为：1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.05mg/L，增殖系数为6.07;直径大小为0.3cm的原球茎最适宜增殖培养，增殖系数为6.10;培养基中添加150mg/L酵母浸膏，对原球茎增殖有明显促进作用；原球茎分化芽苗的最佳培养基为：MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+Tryptone250mg/L+AC1.0g/L，分化率为88.33％；原球茎分化丛生芽的最佳培养基为：MS+NAA0.2mg/L+Tryptone250mg/L+TDZ1.0mg/L，丛生芽增殖系数最高为5.38;适合根形成与生长的培养基为：MS+AC1.0g/L和MS+NAA0.1mg/L+AC1.0g/L，生根率为100％，平均根长2.4～2.54cm:获得根数最多的培养基为：MS+NAA0.1mg/L+AC0.5g/L，平均根数2.06条/苗；采用混合基质(腐殖土：陶粒=5:1混匀)栽植，成活率达93.02％。
　　 3.用21个RAPD随机引物共扩增出180条复性好且清晰的条带，其中多态性DNA条带164条，占总带数的91.11％，平均每个引物产生8.57条带和7.81条多态性条带；杂交F1代偏向亲本大花蕙兰‘溪流’(X)遗传，与其相似性系数的变化范围0.7222～0.7722。

目录

文摘

英文文摘

前言

1 文献综述

1.1 兰属植物杂交育种进展

1.1.1 兰属植物育种的发展简史

1.1.2 兰花的育种手段

1.2 兰花种子无菌萌发研究概况

1.3 RAPD标记技术在兰科植物中的应用

1.3.1 RAPD标记技术简介

1.3.2 RAPD标记在兰花分类、亲缘关系鉴定中的应用

1.3.3 RAPD标记在兰花遗传多样性、品种鉴定研究中的应用

2 本研究的目的和意义

3 材料与方法

3.1 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发体系的建立

3.1.1 种间杂交试验

3.1.2 春剑与大花蕙兰种间杂交种子的无菌萌发

3.1.3 春剑×大花蕙兰原球茎增殖培养

3.1.4 春剑×大花蕙兰原球茎分化培养

3.1.5 生根与炼苗移栽

3.1.6 数据统计与分析方法

3.2 春剑与大花蕙兰及其杂交后代的RAPD分析

3.2.1 材料与试剂

3.2.2 方法

3.2.3 数据统计与分析方法

4 结果与分析

4.1 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发体系的建立

4.1.1 春剑与大花蕙兰种间杂交试验

4.1.2 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发

4.1.3 原球茎增殖

4.1.4 原球茎分化

4.1.5 生根培养

4.1.6 炼苗移栽

4.2 春剑与大花蕙兰及其杂交后代的RAPD分析

4.2.1 基因组DNA检测

4.2.2 RAPD随机引物的筛选

4.2.3 DNA扩增结果及多态性分析

4.2.4 遗传相似性系数分析

5 讨论

5.1 春剑与大花蕙兰种间杂交

5.2 杂交种子的无菌萌发

5.3 原球茎的增殖

5.4 原球茎直接分化芽苗

5.5 原球茎分化丛生芽

5.6 生根培养与炼苗移栽

5.7 春剑与大花蕙兰杂及其交后代的RAPD分析

6 主要结论与下一步研究工作的建议

6.1 主要结论

6.2 进一步研究工作的建议

参考文献

附图(PLATE)

致谢