金顶侧耳质量评价方法及对环磷酰胺致小鼠肝毒性影响的研究

摘要

目的：①建立长白山金顶侧耳中延胡索酸、烟酸和多糖的含量测定方法，为科学评价及有效控制长白山金顶侧耳质量提供实践方法和参考数据；②提取精制金顶侧耳多糖，并探讨其对环磷酰胺所致小鼠肝毒性影响的保护作用，为金顶侧耳多糖的临床应用提供实验基础。
　　方法：①采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，色谱柱为C18柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流动相为甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（5:95），检测波长216 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃，测定长白山金顶侧耳中延胡索酸的含量；采用反相离子对高效液相色谱（IP-RP-HPLC）法，色谱柱为C18柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流动相为甲醇-0.004mol/L庚烷磺酸钠-乙酸（5:95:0.2），检测波长263 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃，测定长白山金顶侧耳中烟酸的含量；分别采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法测定长白山金顶侧耳中多糖的含量，并进行比较。②采用水提醇沉法提取金顶侧耳多糖，并用三氯乙酸法除蛋白得到多糖粗品，用苯酚硫酸法测其多糖含量，考马斯亮蓝法测其蛋白质含量。将实验小鼠分为空白对照组、模型组和金顶侧耳多糖大（0.8 g·kg-1·d-1）、中（0.4 g·kg-1·d-1）、小（0.2 g·kg-1·d-1）剂量组，灌胃给药同时腹腔注射环磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）制作小鼠化疗损伤模型，给药10天后，分别测定小鼠肝组织中丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量；肝微粒体氨基比啉-N-脱甲基酶（CYP2E1）和红霉素-N-脱甲基酶（CYP3A）活性；并用透射电镜观察小鼠肝组织超微结构的形态学变化。
　　结果：①在0.16～1.6μg范围内，延胡索酸对照品进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999，n=5），样品的平均回收率为101.59％，RSD=1.28%（n=6）；在0.08～0.4μg范围内，烟酸对照品进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999，n=5），样品的平均回收率为103.84%，RSD=2.80%（n=9）；苯酚-硫酸法测定金顶侧耳多糖的平均回收率为99.85%，RSD=1.35%（n=9）；蒽酮-硫酸法测定多糖的平均回收率为100.07%，RSD=1.06%（n=9）；蒽酮-硫酸法测得的多糖含量较高。②与模型组比较，金顶侧耳多糖大剂量组明显能降低小鼠肝组织中MDA（P<0.05）含量和提高GSH（P<0.01）含量；金顶侧耳多糖中剂量组对环磷酰胺造模小鼠的肝微粒体氨基比啉-N-脱甲基酶活性有显著性提高作用（P<0.05），大、中、小各剂量组对环磷酰胺造模小鼠的肝微粒体红霉素-N-脱甲基酶活性均有显著性的提高作用（P<0.01）。与模型组比较，金顶侧耳多糖各剂量组肝细胞损伤得到明显恢复。
　　结论：①所建方法简便、准确、重复性好，可测定金顶侧耳中延胡索酸、烟酸含量，苯酚-硫酸法更适用于金顶侧耳中多糖的含量测定。②金顶侧耳多糖对环磷酰胺致小鼠肝毒性具有保护作用。

目录

声明

第一章 引 言

第二章 金顶侧耳质量评价方法研究

2.1 仪器、材料与试剂

2.2 实验方法与结果

2.3 讨论

第三章 金顶侧耳多糖对环磷酰胺致小鼠肝毒性影响实验研究

3.1 仪器、材料与试剂

3.2 金顶侧耳多糖提取及分离

3.3 金顶侧耳多糖对环磷酰胺致小鼠肝毒性的影响

3.4 讨论

第四章结论

参考文献

致谢

附录A(攻读学位期间发表论文目录)

附录B 附图

综述:金顶侧耳化学成分和药理活性研究进展