α-突触核蛋白在脑膜瘤和胶质瘤组织中的表达及其意义

摘要

α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）是神经元特异性蛋白，其异常表达与神经退行性疾病的发病密切相关，α-突触核蛋白是一个由140个氨基酸构成的小分子可溶性酸性蛋白质，约占脑中总蛋白量的0.5％，主要分布于神经元的突触前终末，但也见于神经元的突起、胞浆、核、线粒体等其它部位。大量证据表明，帕金森病（Parkinson’s disease，PD）的发病与α-突触核蛋白的异常表达和聚集密切相关。路易小体是PD的特征性病理变化，纤维化的α-突触核蛋白被证明是Lewy body的主要成份；α-突触核蛋白基因突变（A53T，A30P，E46K）以及二倍体和三倍体变异可以导致常染色体显性遗传的家族性 PD；α-突触核蛋白基因启动子多态性与散发性PD的发病风险有关；α-突触核蛋白转基因动物呈现类似于PD的运动功能障碍、多巴胺能神经元退变以及α-突触核蛋白免疫反应阳性的细胞内包涵体。但是否存在于脑肿瘤组织尚不清楚。
　　本论文的目的是通过观察α-突触核蛋白在脑膜瘤和胶质瘤组织中的表达及其与微管蛋白之间的关系，证明其与脑肿瘤的关系和潜在的意义。首先我们分别利用抗人α-突触核蛋白多克隆和单克隆抗体在人脑膜瘤、胶质瘤组织和对照脑组织进行免疫组织化学染色，比较α-突触核蛋白在脑膜瘤、胶质瘤和对照脑组织中的表达和分布；其次利用免疫荧光组织化学双标方法观察α-突触核蛋白和β-微管蛋白以及突触素（synaptophysin）共存；最后利用免疫共沉淀证明在脑膜瘤和胶质瘤组织中的α-突触核蛋白和β-微管蛋白相互作用。实验结果表明在对照脑组织中，α-突触核蛋白主要存在于神经元的末梢和胞体的胞浆部分，并且与突触素和β-微管蛋白共存。而在脑膜瘤和胶质瘤组织中，α-突触核蛋白主要存在于肿瘤细胞的胞浆，少部分存在于细胞核中，并且与β-微管蛋白在胞浆共存。并且在脑膜瘤和胶质瘤组织中α-突触核蛋白与β-微管蛋白存在相互作用。经过以上实验我们得出结论α-突触核蛋白存在于脑膜瘤和胶质瘤细胞的胞浆和核中，并与β-微管蛋白存在相互作用，提示其可能通过影响微管的聚合而影响肿瘤的增殖、迁移和侵袭性。

目录

声明

前言

第一章 重组人野生型α-突触核蛋白的表达及纯化

1.1仪器与材料

1.1.1实验试剂

1.1.2溶液配制

1.1.3实验仪器

1.2实验方法

1.2.2重组野生型α-突触核蛋白的大量表达

1.2.3野生型α-突触核蛋白重组蛋白的纯化

1.2.4Western blot以及考马斯亮蓝染色进行重组蛋白质的鉴定

1.2.5蛋白定量

1.3实验结果

1.3.1重组人α-突触核蛋白的纯化

1.3.2重组人α-突触核蛋白的鉴定

1.3.3重组人α-突触核蛋白的浓度测定

1.4讨论与结论

第二章α-突触核蛋白在脑膜瘤和胶质瘤组织中的表达及其意义

2.1材料与仪器

2.1.1组织材料

2.1.2实验试剂

2.1.3溶液配制

2.1.4实验仪器

2.2实验方法

2.2.1样品的制备

2.2.2伊红-苏木精染色（H-E染色）

2.2.3免疫组织化学

2.2.3免疫荧光化学

2.2.4免疫共沉淀

2.3实验结果

2.3.1α-突触核蛋白在对照脑组织中的表达

2.3.2α-突触核蛋白在脑膜瘤组织中的表达

2.3.3α-突触核蛋白在胶质瘤组织中的表达

2.3.4α-突触核蛋白与β-微管蛋白相互作用

2.4讨论与结论

参考文献

致谢

附录

综述:突触核蛋白在肿瘤发展中的作用