不同处理对猪精子获能及顶体蛋白活化影响的研究

摘要

本试验的主要目的为探讨不同处理对猪精子质量及顶体蛋白活化的影响。试验主要使用了台盼蓝染色、CTC染色法染色、SDS-PAGE和Western免疫印迹分析等方法，对加以不同处理的猪精子的质膜完整性，超激活运动率、精子活力、顶体反应率及顶体蛋白活化的关系进行检测。试验主要分为：（1）检测两种获能液不同获能时间（1、2、3、4、5h）对猪精子体外获能效率的影响；（2）将人工采集的猪精液分为五组，分别加入不同浓度的（0.1、0.2、0.5、1.0％）DMSO，于38.5℃，5% CO2培养箱中呈45度角倾斜分别孵化（0、10、20、30min）后采用台盼蓝染色和CTC染色法检测精子质量，评估DMSO对获能猪精子质量的影响。（3）对不同处理的猪精子（鲜精精子、获能精子、顶体反应精子、冷却精子、冷冻精子），进行SDS-PAGE和Western免疫印迹分析。试验结果如下所述：
　　1、随着时间的延长，CM与mTBM两种获能液中精子的质膜完整率都逐渐降低，1h与2h时间组差异不显著（P>0.05），其他各组之间差异均显著（P<0.05），表现值分别为：39.9%、37.5%；顶体反应率逐渐提高，5h组均达到最大值，并且各组之间差异均显著（P<0.05），表现值分别为50.5%、49.6%；两种获能液中精子的超激活运动率都逐渐提高，CM中的精子3h时达到最高，表现值为57.9%，mTBM获能液中精子4h时达到最高，表现值为55.7%，而后都逐渐降低。
　　2、随着DMSO浓度和时间的增加精子的活率逐渐下降，除0与0.1%组之间差异不显著之外其他各组之间均差异显著（P<0.05）。随着DMSO浓度和时间的增加（除0.5%、1.0%组外）精子的顶体反应率逐渐提高，DMSO浓度为0.1%时孵育30min时顶体反应率最高，0.5%、1.0%浓度组孵育20min后顶体反应率下降，说明当达到一定浓度或时间时精子出现死亡现象。除0.5%组孵育20与30min之间和1%组10、20、30min之间差异不显著（P>0.05）外其他各组之间差异显著（P<0.05）。
　　3、将新鲜、获能、顶体反应、冷却和冷冻的精子进行SDS-PAGE分析后，进行Western免疫印迹分析，结果表明：新鲜、冷却和冷冻的猪精子处理样中出现分子量约为53 KD和55KD的前顶体蛋白，不存在分子量约为35KD顶体蛋白，但冷却和冷冻猪精子处理样中的前顶体蛋白含量明显少于新鲜猪精子；获能和顶体反应处理组中仅出现分子量约为35 KD顶体蛋白条带，但是顶体反应处理组中的顶体蛋白含量明显少于获能组。

目录

声明

第一章 前 言

1.1精子的获能

1.1.1获能中精子的改变

1.1.2影响精子体外获能的因素

1.2精子顶体蛋白

1.2.1Acrosin活化机制

1.2.1Acrosin生物学活性

1.2.2精子Acrosin的测定

1.3精子的顶体反应

1.3.1精子Ar的过程

1.3.2影响精子AR的因素

1.4精液的冷冻解冻

1.4.1常用冷冻稀释液

1.4.2影响冷冻精液质量的因素

1.5本试验研究的目的和意义

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1时间和地点

2.1.2实验动物

2.1.3主要药品

2.1.4主要仪器

2.2实验方法

2.2.1药品的配制

2.2.2实验内容

2.2.3统计分析

第三章 结果与分析

3.1不同获能液对精子体外获能效率的影响

3.1.1CM获能液对精子体外获能的影响

3.1.2mTBM获能液对精子体外获能的影响

3.2DMSO对精子质量的影响

3.2.1不同DMSO浓度对精子活率的影响

3.1.2不同DMSO浓度对精子顶体反应的影响

3.3不同处理对精子前顶体蛋白活化的影响

3.3.1不同处理对猪精子蛋白的影响

3.3.2免疫印记分析—Proacrosin

3.3.3免疫印记分析—Acrosin

第四章 讨 论

4.1不同获能液对精子体外获能效率的影响

4.2在获能液中添加DMSO对猪精子质量的影响

4.3不同处理对猪精子前顶体蛋白的影响

第五章 结 论

参考文献

致谢

附录：硕士期间发表的论文